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吖啶酯及吖淀酰胺类之间貌合神离的点

2021-06-01278

发光的机理

发光反应中在形成电子激发态中间体之前,联结于吖啶环上的不发光的取代基部分从吖啶环上脱离开来,即未发光部分与发光部分分离,因而其发光效率基本不受取代基结构的影响。

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水解机理

吖啶酯和吖啶酰胺在酸性溶液中(pH小于4.8)都很稳定,该类化合物及其与蛋白的偶联物在室温下保存4周,其光量子产率不降低;冻干品在-20℃下,可保存一年以上。但当pH大于4.8(尤其是在碱性溶液中),吖啶酯和吖啶酰胺类化合物由于发生部分水解而降低其稳定性,水解机理。在水溶液中当其受到OH-进攻时生成一假碱,假碱继续在OH-作用下酯键断裂,后生成N-甲基吖啶酮,水解过程为不发光的暗反应过程。

不同点:

抵抗水解的能力不同

吖啶类化合物在水溶液中的水解程度,随pH值增大而增大;随温度升高而增大。大多数吖啶酰胺类化合物的稳定性较吖啶酯类高,其原因是由于C-N键与C-O键的键级不同,C-N键大于C-O键;吖啶酰胺类化合物抵抗水解的能力强于吖啶酯类。

热稳定性不同

对于吖啶化合物来说,吖啶环及酚环或苯磺酰环上,不连取代基与连接不同取代基其稳定性不同。通常吖啶环或酚环或苯磺酰环上,连有甲基等取代基的吖啶酯或吖啶磺酰胺,由于空间位阻大的原因热稳定性增加,连有吸电子基团时,因有利于亲核取代反应而使稳定性降低。

相同点:

无需催化剂

吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物化学发光不需要催化剂,在有H2O2的稀碱性溶液中即能发光,具有许多优越性,特别是无须一个催化过程,也不需要增强剂,从而降低了背景发光,提高了信噪比,干扰作用少。

易于与蛋白质联结

该类化合物作为化学发光免疫分析的发光标记物,还具有其它方面的优点,如光释放快速集中、发光效率高、发光强度大,易于与蛋白质联结且联结后光子产率不减少、标记物稳定,在2-8℃下可保存数月之久,因此吖啶酯或吖啶磺酰胺是一类非常有效的化学发光标记物。

发光类型

这类化合物发光为闪光型,加入发光启动试剂后,0.4s左右发射光强度达到zui大,半衰期为0.9s左右。吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物应用于CLIA,通常采用的体系是Acridiniumester/H2O2系统,即用吖啶酯或吖啶磺酰胺标记抗体或抗原,用HNO3+H2O2和NaOH作发光启动试剂。有些在发光启动试剂中加入TritonX-100,CTAC,Tween-20等表面活性剂以增强发光。

 


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