epicentre MV41025 MiniV™ In Vitro Transcription Kit
2019-11-06369
epicentre MV41025 MiniV™ In Vitro Transcription Kit
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产品名称:MiniV™ In Vitro Transcription Kit
货号:MV41025
规格:25 Rxns
存储温度:-20℃
品牌:lucigen / epicentre</p>
供应商:中北林格</p>
产地:us</p>
发货地:北京</p
产品描述
epicentre MV41025 MiniV™ In Vitro Transcription Kit 应用领域
MiniV™ 体外 转录试剂盒提供MiniV™RNA聚合酶*(MiniV RNAP)和所有其他组件,可 使用与单链噬菌体N4启动子功能连接的ssDNA模板进行RNA 体外转录。MiniV RNAP是N4病毒粒子RNA聚合酶的转录活性1,106个氨基酸结构域。1 与衍生N4病毒粒子的酶一样,MiniV RNAP保留了转录具有单链N4启动子的ssDNA模板的独特能力。
由于MiniV RNAP在RNA:DNA杂种上缺乏RNA链置换或解链活性,因此它需要 大肠杆菌 单链结合(EcoSSB)蛋白来从DNA模板链置换RNA转录本,以进行有效 的体外 转录。EcoSSB激活的置换量似乎随模板链的总长度和转录本的长度而变化。2 MiniV RNAP的RNA合成也需要NTP和Mg 2+。
可以转录包含合适的N4启动子的任何长度的线性模板。尽管MiniV 体外转录反应产生的RNA产量 取决于模板的序列,但通常每摩尔线性ssDNA模板产生1-5摩尔RNA。像其他RNA聚合酶一样,MiniV RNAP也可以通过旋转环状ssDNA模板(例如,使用CircLigase™ssDNA连接酶生产的环状模板)的圆环转录来合成同形的RNA。
MiniV RNAP使用的噬菌体N4转录启动子的特征是保守序列和5 bp茎,3碱基环发夹结构。3,4
epicentre MV41025 MiniV™ In Vitro Transcription Kit 图例说明
图1.单链DNA寡核苷酸模板的MiniV™转录。 将含有噬菌体N4 P2启动子序列的71 nt单链寡聚脱氧核苷酸模板在标准100微升含100 pmol MiniV RNA聚合酶,0.75 mM NTP和20 ng /μl的20微升反应中于37°C转录1小时。的SSB蛋白。反应产物可视化与SYBR®金染色的20%丙烯酰胺-8M尿素变性凝胶。泳道1,基于71个碱基的单链寡核苷酸模板(MiniV Kit中提供的对照模板);泳道2,预期的43个碱基的RNA转录物产生。
P1 3´;-CAACGAAGCGTTGAATACC -5´;
P2 3´;-TTCTTCGAGGCGAAGAAAACC -5´;
P3 3´;-CGACGAGGCGTCGAAAACC-5´;图2A。被N4 MiniV™RNA聚合酶识别的启动子。 启动子P2是这三个中Z具特色的,建议用于构建自己的MiniV转录单链DNA模板的启动子。 |
3´-.... TTCTTCGAG GCGAAGAAAA | 抄送 | ..... --5´ DNA模板 |
+1 | |
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5´- | G | ..... -3´ RNA转录本 |
图2B。从含有噬菌体N4的P2启动子的单链DNA模板转录RNA。
References
Kazmierczak, K.M., et al. (2002) EMBO J., 21, 5815.
Davydova, E.K. and Rothman-Denes, L.B. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100, 9250.
Haynes, L.L. and Rothman-Denes, L.B. (1985) Cell 41, 597.
Glucksmann, M.A. et al. (1992) Cell 70, 491.
*Covered by issued and/or pending patents.
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MV41025 | 25反应 |
内容物: MiniV™RNA聚合酶(包含RNaseYZ剂),MiniV™5X转录缓冲液, 大肠杆菌 单链DNA结合蛋白,10 mM ATP,CTP,GTP和UTP溶液,DTT,无RNase的水,MiniV™Control ssDNA模板,无RNase的DNaseI。 |
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MV41025 | 25 Reactions |
Contents: MiniV™ RNA Polymerase (contains an RNase inhibitor), MiniV™ 5X Transcription Buffer, E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein, 10 mM ATP, CTP, GTP and UTP Solutions, DTT, RNase-Free Water, MiniV™ Control ssDNA Template, RNase-Free DNase I. |
对此产品有兴趣,可联系中北林格获取更多详细信息。</p>