荧光显微镜应用于肿瘤辅助诊断研究

荧光显微镜应用于肿瘤辅助诊断研究

【案例背景】

深圳某科研检测公司需要开展对肿瘤的辅助诊断研究，需要用到荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）. Mshot明美推荐了研究级荧光显微镜MF43-N搭配四通道光源MG-120，可以即开即用提供高质量的荧光和明场成像，可以自主选择和升级荧光激发块，可对FISH样品进行单色荧光或双色荧光观察。搭配明美自主研发的FISH荧光原位杂交分析软件，快速成像，自动着色，一键合成多色荧光图像，直观地判断实验结果，功能强大，使用方便，效果得到客户认可。

【实验/设备条件】

防震的工作台、暗室环境

【仪器/耗材清单】

明美研究级荧光显微镜MF43-N，载玻片，盖玻片，香柏油

【样品】

待检的FISH样品

【实验/操作方法】

（一）概述

实验主要使用明美研究级显微镜MF43-N和FISH荧光原位杂交分析系统进行，荧光显微镜用于荧光激发和放大FISH样品的信号点，FISH荧光原位杂交分析系统可对荧光显微图像进行捕捉和处理。

（二）制样

FISH样品一般为手术组织切片，穿刺组织切片，肿瘤细胞块等，不同样品类型，制样和染色方法会有不同。

①组织切片以HER2常规石蜡包埋组织切片为例，新鲜样本取材后经过固定、水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和烘烤制备成常规切片，过程中特别注意固定和切片，样品厚度保持在3-5um。染色可分为预处理、杂交、洗涤、复染四步，尤其注意预处理的脱蜡、煮片、酶消化，以及杂交中的变性（加荧光探针）。

②细胞学样品以产前染色体数目检查为例，制样经过低渗、预固定、滴片三步，需要充分的低渗和合适的细胞密度，可能需要用到倒置显微镜相衬观察来控制细胞密度。染色也可分为预处理、杂交、洗涤、复染四步，预处理的消化和充分洗涤比较影响成像效果。

（三）观察

①将制样好的玻片放上载物台，用样品夹固定，在盖玻片上滴一滴香柏油。

②把明美荧光显微镜的激发光切换到紫外荧光，物镜切换到100X的油镜，调节调焦机构使物镜与香柏油接触，然后左右微微旋转物镜转盘，使物镜与香柏油充分接触，排出空气，然后进行对焦

③选择合适的样品区域，分别用紫外、蓝色和绿色激发光观察FISH样品，然后用明美FISH荧光原位杂交分析系统分别进行采图，在软件上对图片进行合成处理，得到所需的FISH样品图片。

MF43-N+MSX11拍摄的FISH图片

FISH样品在紫外激发光的照射在，显现出蓝色的细胞轮廓的信号，在蓝色激发光的照射下在细胞内显现出绿色的探针信号，在绿色激发光的照射下在细胞内显现出红色的探针信号。

【实验结果/结论】

选择细胞核边界完整、无重叠，标记的红色信号和标记的绿色信号清晰的细胞，随机计数至少20个细胞核中双色信号。判断信号点有无分离或者有无扩增等，并在专业的病理医师或技术人员的指导下对结果进行判读，保证结果的准确性。明美研究级正置荧光显微镜MF43-N采用优良的无限远光学系统，搭配四通道光源MG-120，荧光激发信号强，并且可以即开即用，可以选配单通或双通荧光激发块，可供选择的荧光波段繁多且亮度高，可满足FISH领域的研究需要，也应用于生物制药，医学检测、疾病预防等领域内的荧光检测。

【场景图/实拍效果图】

荧光显微镜MF43-N，现场拍摄的FISH样品效果图

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来源：https://www.mshot.com/article/2058.html