如何提升CY5/CY5.5荧光成像效果之光源篇

如何提升CY5/CY5.5荧光成像效果之光源篇

提升CY5/CY5.5的荧光成像效果，通常是从以下四个维度做出改进，1.摄像头；2.荧光光源；3.荧光滤色片组；4.荧光物镜。在上一期的文章中，我们已经分享过如何从摄像头挑选角度提升CY5/CY5.5的成像效果，今天我们继续讲第二个维度，荧光光源。

光源如何影响CY5/CY5.5的成像效果？

CY5染料的激发光谱和发射光谱

荧光光源在荧光成像中的作用是激发荧光染料，要讨论如何更好地激发荧光，就要先从荧光染料的光谱特性说起。我们看到的很多资料都会写着荧光染料的激发波长和发射波长，这两个数值都是峰值数值，以便描述，在峰值附近其实还有一定的范围会有激发和发射，只是这些波段的荧光效率相对低，效果没那么好。

理想的荧光光源，一需要光谱覆盖荧光染料的峰值激发波长，二需要在这个波长有较高的光强，这样才能获得更好的激发效果，对于CY5来说这个数值大概在650nm左右，而CY5.5则在670nm左右。

汞灯光源的光谱分布

CY5/CY5.5成像效果不好，一个典型原因是常见的汞灯荧光光源并不适合CY5/CY5.5成像。通过汞灯光源的光谱图，我们可以看到，汞灯600nm后的光谱没有波峰，光强是比较弱的，因此理论上激发效果不会好。

汞灯实测的CY5成像光功率

而在实测中，汞灯光源在CY5波段的光功率也很明显低于其他波段，还不到DAPI或GFP波段光功率的一半。

·传统热光源哪个更适合CY5/CY5.5成像？

传统热光源光谱特性对比

汞灯不是合适的CY5/CY5.5荧光光源，那么传统热光源中哪一个比较合适呢？这里对比四种传统热光源的光谱特性，其中卤钨灯为了方便在图上呈现，呈现的数值是在实际数值基础上做了10倍放大，也就是说，虽然卤钨灯优势光谱集中在600nm后的区域，但光强太低，并不适合做荧光光源。

氙灯实测的CY5成像光功率

氙灯是传统热光源中更适合CY5/CY5.5的选择，它跟汞灯都属于高压弧灯，稳定性比汞灯好，寿命可以到1000-2000小时，有着近似太阳的连续光谱、均匀光强，实测CY5的激发光功率大约可以到汞灯的2倍，但同时功率要到汞灯的1.5倍，且发热大，另外DAPI波长的激发效果也比较差。

·更值得推荐的CY5/CY5.5激发光源：LED荧光光源

LED荧光光源激发的CY5

传统热光源用于CY5/CY5.5成像有其局限性，目前成像效果比较好的有两种光源，一种是搭配共聚焦/全内反射使用的激光光源，一种是适合普通荧光显微镜的LED荧光光源。LED荧光光源是更适合大部分用户的选择。

四通道光源MG-120的部分可选光谱

四通道光源MG-120可以按需配置4个LED荧光通道，每个通道独立控制、独立记忆光强，通过选配R波段激发配置，可以实现汞灯3-5倍的CY5/CY5.5激发效果，优于氙灯，同时DAPI激发效果也优于氙灯，更能全面满足各种荧光染料激发需求。

MG-120寿命更长，效果更好

此外，基于LED技术的MG-120作为荧光光源，不仅相比汞灯和氙灯荧光光源功耗低、发热小、光强可调节，其使用寿命也可以达到5万小时，远胜于汞灯和氙灯，大大降低了设备维护的人力成本和时间成本，让实验室得以更高效运行。

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来源：https://www.mshot.com/article/1864.html