液滴微流控：Picoinjection微注入单细胞高通量测序

• 大多数单细胞转录组测序方法都会扩增聚腺苷酸化转录本的末端，仅捕获总细胞转录组的一小部分。 这排除了许多长非编码、短非编码和非聚腺苷酸化蛋白质编码转录物的检测，并阻碍了选择性剪接分析。 因此，我们开发了 VASA-seq 来检测单个细胞中的总转录组，这是通过在细胞裂解后对所有 RNA 分子进行片段化和加尾来实现的。 该方法与基于板的格式和液滴微流体兼容。 我们将 VASA-seq 应用于原肠胚形成和早期器官发生期间发育中的小鼠胚胎中的 30,000 多个单细胞。 通过分析总单细胞转录组的动态，我们发现了细胞类型标记，其中许多基于非编码 RNA，并通过检测非聚腺苷酸化组蛋白基因进行了体内细胞周期分析。 RNA 速度表征得到改进，准确地追溯血液成熟轨迹。 此外，我们的 VASA-seq 数据提供了哺乳动物发育过程中可变剪接的综合分析，突出了血液发育和心脏形态发生过程中的大量重排。