流式荧光抗体染色相关问题 解决方案

文档简介无法标记细胞1、抗体是否正确保存（4摄氏度避光保存）；2、抗体是否超过使用期限；3、样品中是否加入了正确的抗体（一抗或二抗）；4、确保抗体结合了荧光物质。如果抗体未结合荧光染料，确保使用了适当的荧光标记二抗；5、确保二抗有活性是否曾与其它一抗联合使用？6、使用的二抗是否能识别所用一抗；7、PE或APC标记的抗体，确保产品未冷存；8、确定样品是否表达要检测的抗原。建议设一组已知表达改抗原的样品作为阳性对照；9、样品种属与抗体是否匹配。10、确保使用正确波长的激发光及正确的分析通道。荧光强度弱1、可能是过度稀释抗体。请按照说明书正确稀释抗体；2、间接染色中造成弱阳性的原因可能是前带效应，即高浓度抗体聚集阻碍特异性抗体和抗原的结合，可能会引起弱的染色结果。解决方法：稀释抗体；3、细胞数过多也会引起弱阳性结果。调整细胞至说明书建议密度；4、可能与抗原表达情况有关。请检查相关文献以确定抗原表达水平；5、若抗原表达弱，请选择荧光强度高的荧光标记抗体；6、使用有交叉反应的抗体比特异性抗体更易出现弱阳性结果；7、优化一抗和二抗的孵育时间及温度。非特异性染色1、非特异性染色，可能是由于自发荧光引起的。解决方法：在同样的检测条件下，加入空白细胞对照，可得出细胞自发荧光的水平。2、选择CD16/32抗体（SG产品编号：M10161）封闭Fc受体，可减少抗体和细胞的非特异性结合。3、可能是使用二抗引起的非特异性染色。请选择与检测组织没有交叉反应的二抗。4、染色后是否充分洗涤。5、降低抗体浓度，可减少非特异性染色。同一抗体，PE标记染不上，FITC标记的染色结果良好1、PE标记的抗体是否被冷存。如果是此种情况，建议购买新抗体；2、可能是多聚甲醛固定引起的问题。请使用现配的多聚甲醛或将细胞处理后不经固定尽快分析。散射信号异常1、确保尽可能使用新鲜的细胞。散射光信号会显示出死细胞和细胞碎片；2、刺激细胞会影响细胞的散射信号；3、如果在实验过程中使用了裂解液，请确保裂解液新鲜并且配置方法正确。结果不符合预期1、有些试剂可能会对某些特定抗原产生影响。例如：EDTA会影响某些血小板表面标志分子；2、裂解液也可能会影响某些抗原的表位。请选择不会干扰抗原检测的裂解方式；3、检测某些胞内表达的抗原时，需要对细胞进行破膜处理。上海索来宝021-54100800