全血基因组DNA提取试剂盒简介及说明书

文档简介全血基因组DNA提取试剂盒说明书货号：D1800规格：50T/100T保存：室温（15℃-25℃）干燥保存，复检期12个月，2℃-8℃保存时间更长。试剂盒内容：50T100TRNaseA1ml1ml×2蛋白酶K1ml1ml×2红细胞裂解液120ml120ml×2溶液A15ml25ml溶液B15ml30ml漂洗液15ml30ml洗脱液10ml20ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品简介:本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取全血基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够GX、专一吸附DNA，可Zda限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。操作步骤：使用前请先在漂洗液和溶液B中加入无水乙醇，加入休积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1、样品的处理（本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的0.lml-1ml血液样品）：a、在血液样品中加入2-3倍体积的红细胞裂解液，充分颠倒混匀，12000rpm离心1min，小心吸去上清，沉淀应为白色或淡红色，如果裂解不彻底，可重复以上述步骤一次。向沉淀中加200ul溶液A，振荡至彻底混匀。b、如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量为5-20u1，不需要再用红细胞裂解液处理，直接加200ul溶液A，振荡至彻底混匀。2、向悬浮液中加入20ul（10mg/ml）的RNaseA，充分颠倒混匀，室温放置10min。3、加入20ul（10mg/ml）的蛋白酶K，充分颠倒混匀，65℃水浴消化30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。4、加入2倍体积溶液B（使用前请先检查是否己加入无水乙醇），充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入股附柱中，室温放置2min，5、12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。6、向吸附柱中加入700ul漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。7、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。8、12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜ZY悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。注意事项:1、本试剂盒置于室温（15-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制各大分子量血液基因组DNA，可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时，有PCR扩增YZ现象。3、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。5、绝大多数哺乳动物的全血如入全血中的红细胞无核，故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞，以免影响红细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量减少为5-20ul，不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。6、洗脱缓冲液的体积**不少于50ul，体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右（可用NaOH将水的pH值调至此范围），pH值低于7.0会降低洗脱效率。相关产品：D1850全血基因组DNA提取试剂系统E1020EB染色液D10106×DNALoadingBufferT106050×TAE缓冲液T10505×TBE缓冲液M1060D2000DNALadderM14001kbDNALadderG8142GoldViewII型核酸染色剂（5000×）