谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒 说明书

文档简介谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase,GSH-Px）试剂盒说明书（50T）一、测定意义GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化GSH氧化的主要酶之一。GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。二、测定原理GSH-Px可以催化GSH产生GSSG，而谷胱甘肽还原酶可以利用NADPH催化GSSG产生GSH，GSH-Px是限速酶，通过检测NADPH的减少量就可以计算出GSH-Px活性。三、实验中所需仪器及设备紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml石英比色皿、双蒸水四、试剂组成和配置试剂一：粉剂一×1支，4℃保存3个月粉剂二×2支，4℃保存3个月（不同公司保存温度不同）粉剂三×2支，4℃保存3个月液体一×2支，4℃保存3个月液体二×1支，常温保存五、样品前处理a）试剂一配制：粉剂一加150ml双蒸水充分溶解，4℃保存b）称约0.1g组织，加入1ml试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清（如上清不清澈，再离心3min）六、GSH-Px测定操作a）混合试剂配制：粉剂二1支，粉剂三1支，液体一1支混合加试剂一定容至40ml，临用前配制b）底物液配制：液体二加双蒸水定容至5mlc）按下表加样测定管空白管混合试剂0.8ml0.8ml双蒸水／0.1ml样品液0.1ml／底物液0.1ml0.1ml37度预温3min加底物液后，迅速混匀，于340nm处测定第0s和第180s的吸光值，分别记为A1和A2.七、GSH-Px活力计算a）GSH-Px活力单位定义：每mg蛋白每分钟氧化1μmolNADPH定义为1个活力单位。b）计算公式：GSH-Px活力单位=（△A测定△A空白）/3.11×（V总/V样）÷Cpr=（△A测定△A空白）×3.125÷Cpr△A=A2-A1V总：反应总体积（ml）V样：所用样品体积（ml）Cpr：蛋白浓度（mg/ml）注意事项：1、样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力2、混合试剂须现配现用，配完后置于冰上3、此试剂盒仅适用于动植物组织4、测定过程操作须迅速优质试剂质量放心价格Zdi为ZG生物产业做贡献订购热线021-54100800