利用Patchliner Dynamite8实时模拟IK1在人诱导多能干细胞来源的心肌细胞中的作用

文档简介文摘:

目前的体外试验通常不能很好地预测心脏倾向性，因为它们聚焦于细胞系中过表达的单个离子通道。另一方面，人诱导多能干细胞衍生心肌细胞(hiPSC‐CMs)为使用高通量系统对人心肌细胞进行药物测试提供了一个独特的机会。然而，这些细胞在离子通道表达和电生理特性上与成人心肌细胞不同。hiPSC‐CMs的主要挑战之一是离子通道的生理表达，如向内整流器(如Kir2.1-2.3)，它引导心脏向内整流钾电流(IK1)。IK1是维持心脏细胞静息膜电位稳定的主要贡献者之一，这对兴奋性至关重要。膜片钳研究显示，在hiPSC‐CMs中，这只在低水平表达，有时完全不表达。动态钳是一种将离子流(如IK1)引入细胞以补偿内源性表达缺失的方法，从而提供电位来记录hiPSC‐CMs中更稳定的动作电位。在本文中，我们描述了在自动膜片钳装置(Patchliner)上使用hiPSC‐CMs和自动动态膜片钳附加装置(Dynamite8)的方法。我们描述了在Patchliner上使用的优化细胞处理和收获协议，以及在动态钳模式下自动执行实验和数据分析所需的步骤。©2019 by John Wiley & Sons, Inc.