为热熔实验提供更快的升温速率——使用 Cary 3500 紫外-可见分光光度计在任意升温速率下获得相同结果

文档简介升高温度可诱导双链核酸分离为单链。在一定温度下，碱基对之间的氢键发生断 裂。热熔实验利用了腺嘌呤-胸腺嘧啶 (A=T) 与鸟嘌呤-胞嘧啶 (GΞC) 核苷酸之间氢键 数的差异。由于 GΞC 核苷酸含有三个氢键，解离所需热能大于 A=T 对所需的热能。 这表示含有更多 GΞC 对的 DNA 要在更高的温度下才能熔解。熔解温度 (Tm) 可指示 样品中的碱基组成（GΞC 与 A=T 的比例）。制造商和研究人员常将 Tm 用作 QC 校验 指标。 使用紫外-可见分光光度法测定熔点，利用的是单链核酸在 260 nm 处的吸光度高 于双链核酸的原理。图 1 显示了使用小干扰 RNA (siRNA) 样品的示例，与 25 °C 相 比，85 °C 下 260 nm 处的吸光度明显更高。