使用迭代 MS/MS 数据采集结合 Lipid Annotator 软件和 6546 LC/Q-TOF 改善血浆脂质组的覆盖范围

文档简介基于质谱的脂质组学面临的一项主要挑战是，实现对生物样品中宽浓度范围内大量 不同脂质的全面表征。虽然鸟枪法脂质组学推动了脂质分析领域的发展，但它受到 一些限制，包括无法区分可能具有重要生物学意义的同质异位物质，并且由于电 离YZ而导致动态范围较窄。由此催生了将GX液相色谱 (HPLC) 与高分辨率质谱 (MS) 联用的基于色谱的脂质分析方法。 为了与计算机生成的数据库进行子离子谱图匹配，可靠的脂质标注需要在 MS/MS 模 式下进行数据采集。然而，虽然液相色谱分离有助于阐明同分异构脂质并降低复杂 性，但数据依赖型高分辨率 MS/MS 数据受到色谱洗脱过程中可选择用于碎裂的母离 子数量的限制。因此，在复杂样品的单次分析中无法获得所有目标 MS/MS 谱图。由 于存在浓度偏差，该策略经常遗漏重要的低丰度脂质。 本应用简报展示了应对这些挑战的解决方案。我们使用反相 (RP) 色谱，其非常适合 分离许多同分异构脂质，并且是全面分析血浆1 、组织2 和细胞脂质的常用方法。将 这种液相色谱分离技术与 Agilent 6546 LC/Q-TOF 相结合，后者是一种专门设计用于 同时提供宽动态范围和高分辨率的质谱仪，并且其分辨率不受采集速度的影响。我 们还评估了全自动 Q-TOF 迭代 MS/MS 采集模式，其中对样品多次进样，并循环排 除之前选择用于 MS/MS 碎裂的母离子。这些结果表明，使用迭代 MS/MS 能够显著 改善血浆脂质组覆盖范围。可以将迭代 MS/MS 数据用于 Agilent Lipid Annotator 软 件，作为完整脂质组学工作流程的一部分。