马疱疹病毒抗体（HHV Ab）ELISA检测试剂盒说明书

文档简介马疱疹病毒抗体(HHVAb)ELISA检测试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中马疱疹病毒抗体(HHVAb）表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中疱疹病毒抗体(HHVAb）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中马疱疹病毒抗体(HHVAb）的存在与否。马疱疹病毒抗体(HHVAb)ELISA检测试剂盒操作步骤1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。马疱疹病毒抗体(HHVAb)ELISA检测试剂盒计算和结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品OD值<临界值（CUTOFF）者为疱疹病毒抗体(HHVAb）阴性阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者为疱疹病毒抗体(HHVAb）阳性