细胞核的分离技术说明

文档简介细胞核的分离技术说明(1)细胞悬浮于适量预冷的溶液A中，吹打均匀后加入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块的器皿中，一手持之，一手将匀浆杵垂直插人管中，左右转动同时上下移动匀浆杵，研磨若干次，用3层纱布过滤后(也可采用低速离心的方法)以去除未破裂细胞，后收集匀浆液于离心管中，然后制备一张滴片，做好标记，显微镜下观察完整细胞数量。如果细胞数量过多，则继续匀浆，如果非常少，则匀浆完毕。(2)将装有匀浆液的离心管配平后，放人低温离心机，4℃，以2500r／min离心15min；弃上清，将沉淀物用6ml含0．1％(V/V)TitonX-100的溶液A悬浮沉淀物，以2500r／min，离心15min；弃上清。(3)将沉淀悬浮于6ml溶液B中，取6支超速离心管，每管加6ml溶液C，然后把细胞核悬液铺在溶液C上层，以25000r／min离心60min。(4)弃去上清，用溶液A轻轻荡洗管壁及沉淀物表面两次。将离心管倒置，用滤纸擦干管口。(5)向离心管底部滴加几滴溶液A，用玻璃棒轻轻搅匀，然后补加10ml溶液A，以2500g离心20min，弃上清液，沉淀物为纯化的细胞核。