苏木精-伊红染色使用说明

文档简介苏木精-伊红染色使用说明【试剂配制】苏木精染液苏木精配方很多，现介绍常用的是Harris苏木精染液。苏木精1g95％乙醇溶液10ml钾矾或铵矾20g蒸馏水200ml0.5g冰醋酸8.0ml先将苏木精溶于乙醇溶液。钾矾加温溶解烧瓶后，将倒入，继续加热1min。加热停止后，缓慢加入0．5g，再继续加热煮沸1min。迅速将烧瓶移人冰水内。染液冷却呈深色时，加冰醋酸过滤后即可使用。棕色磨口瓶保存。室温保存2个月，4℃保存4个月左右。1.0％伊红染液将1.0g水溶性伊红溶100ml蒸馏水中，每100ml伊红液中加0.2ml冰醋酸。【实验步骤】(1)石蜡片经脱蜡、水化，单层细胞片经漂洗固定。(2)苏木素染液染5～10min(染色时间与温度、染液成熟度有关)。(3)自来水换数次，标本转为深蓝色。(4)分色：浸入1％稀盐酸乙醇液(100ml75％乙醇溶液中加1d盐酸)分色数秒钟至1min，脱去多余的蓝浮色，标本转为淡紫红色镜下呈紫红色，胞质无色或灰蓝色(后者为幼稚细胞)。(5)蓝化：自来水浸洗10min或数小时，甚至更长，标本从淡紫红色转为鲜艳的浅蓝色。注意：为缩短自来水浸洗时间，使苏木素更加显色，可将标本置淡氨水溶液(400ml自来水加氨水2滴)中10min，切片很快呈鲜艳的浅蓝色，经此处理的标本，要经自来水充分浸洗，否则会影响伊红染色。(6)蒸馏水漂洗。(7)伊红染液5～10min，进行对比染色。(8)用蒸馏水洗去玻片的浮色,经70％、80％、90％梯度乙醇溶液脱水各一次，再分别经95％、100％乙醇溶液脱水各两次，每次1min。(9)浸入二甲苯两次，每次1min。中性树胶封片【注意事项】(1)Harris苏木精染液即配即用，不能久存，宜少量配用。(2)HE染色时，除大批标本采取浸染外，一般以滴染为好。染液反复使用而被水稀释,使特异性染色和染色速度下降。(3)苏木精染液出现沉淀现象，是染液变质的一种指示，但滤液仍可使用一段时间。苏木精染液效力判断方法为：将苏木精染液滴人自来水中，若染液出现由紫红色变为蓝色的现象，即证实染液有效。(4)苏木精染色后，盐酸乙醇溶液分色是关键步骤：以细胞核染色清晰、细胞质基本无色为佳。核过染，延长分色时间；染色太浅，则应重新染色。(5)伊红染色后，低浓度乙醇溶液脱水后极易脱色：为防止此现象的发生，标本脱水至95％乙醇溶液后，再转入95％乙醇溶液配制的1％伊红液中复染3～5min分钟，然后继续脱水透明,可获得满意效果。(6)无水酒精脱水后，转入二甲苯中出现混浊现象，为脱水不彻底的表现。此时应退回乙醇溶液或更换100％乙醇重新脱水。(7)封片时，盖玻片要大于切片。切片裸露，标本很快褪色。(8)市售95％乙醇溶液常含杂质，只能用于脱水或清洁玻片。(9)二甲苯是一种易挥发的有毒液体，实验者要带眼罩、口罩、手套，在通风的地方操作。