细胞活体染色的原理和技术

文档简介细胞活体染色的原理和技术实验原理活体染色是指对生命有机体的细胞或者组织能着色，但又无毒害的一种染色方法。目的在于显示生活细胞内的某些天然结构，同时不会影响细胞的正常生命活动和引起细胞死亡。活体染色技术可以用来研究生活状态下的细胞结构和生理、病理状态变化。液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，具有重要的功能。中性红（neutralred）是液泡的特殊染色剂，只将液泡染成红色。对于活细胞，细胞质和细胞核不会被染色。实验仪器、材料和试剂1）仪器和用具：显微镜、镊子、小烧杯、吸水纸、载玻片、盖玻片2）材料：洋葱鳞茎3）试剂①Ringer溶液：NaCl8.5g、CaCl20.12g、NaHCO30.20g、KCl0.14g、Na2HPO40.01g、葡萄糖2.0g，加蒸馏水至1000mL。②1％和1/3000中性红溶液：称取0.5g中性红溶于50mLRinger溶液，稍加热使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶暗处保存，防止氧化沉淀失去染色能力。临用前取1％中性红溶液1mL，加入29mLRinger溶液混匀，装入棕色瓶备用。③0.85％的生理盐水。④联苯胺溶液：在0.85％的盐水中加入联苯胺至饱和为止，临用前加入20％H2O2，1滴/2mL。⑤钼酸铵溶液：称取0.1g钼酸铵溶于100mL0.85%生理盐水。实验步骤1.植物细胞液泡的活体染色洋葱内表皮：撕取洋葱鳞茎内表皮，放在加有一滴1/3000的中性红染液的载波片上，染色10min，用吸水纸吸去中性红染液，换上蒸馏水，盖上盖玻片，显微镜观察，可见到被染成砖红色的ZY大液泡。黄豆根尖：1）取一干净载玻片，滴一滴1/3000中性红染液；2）用刀片将初生的黄豆根尖（约1－2cm长）切一纵薄片，置染液中，染8分钟；3）用吸管吸蒸馏水滴在染液周围，使染液冲淡，吸去再换水使染液近无色；4）用盖玻片盖在样品上，吸去多余水分；5）观察：在高倍镜下，先观察分生区细胞，寻找染成红色的圆形液泡，这是初生的幼小液泡；由分生区向伸长区观察，在长方形细胞中寻找染色较浅，体积增大的液泡；在根毛区寻找体积更大的液泡，有的占据胞质大部分，将细胞核挤至一侧。