免疫组化试剂盒使用说明书

文档简介上海哈灵生物科技有限公司免疫组化试剂盒使用说明书保存方法：2-8℃保存。有效期：一年。生产日期：见封口。工作原理：辣根过氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不会遮盖抗原的结合部位，具有较高活性及特异性，可溶性佳，生成的产物不扩散，可作用于多种底物，产生不同颜色且HRP穿透力强，易进入细胞内。DAB在H2O2存在的情况下，可以作为HRP的电子供体，产生褐色的不溶颗粒，可作为显色的试剂。试剂盒内容：名称规格10.01mol/LpH6.0枸橼酸盐缓冲液0.5L2PBS缓冲液1L3广谱二抗1.5mL430%H2O25mL5DAB显色液I0.3mL6DAB显色液II0.3mL自备试剂：无水乙醇、苏木素。操作步骤：1.60℃常规脱蜡至水后，将石蜡切片先后浸入二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ各10min。然后逐级降浓度酒精入水，每次3-5min。①无水酒精3－5min②90%酒精3－5min③85%酒精3－5min④75%酒精3－5min⑤PBS洗涤3次每次5min2.热修复抗原：将切片置于0.01mol/LpH6.0枸橼钠缓冲液，微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10min后，反复1-2次，置于室温自然冷却。0.01mol/LpH7.0左右的PBS洗涤3次，每次5min3.消除内源性过氧化物酶：用3%H2O2室温孵育5-10min，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗涤2-3次，每次5min；4.滴加一抗：滴加适当稀释的一抗到切片上，37℃孵育一定时间或者4℃隔天，pH7.4的PBS洗涤3次，每次5min。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）5.加入广谱二抗，37℃孵育一段时间，取出后PBS洗涤3次，每次5min。6.DAB显色：取DAB显色液I及II各50微升加至入1mL的水中，配成DAB工作液，滴加到切片上，室温显色，镜下控制反应时间。若无背景出现则可继续显色。蒸馏水充分洗涤以终止反应。7..观察显色后自来水冲，苏木精复染1-2min，，自来水冲10min，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，干燥，分析拍照