纯化线粒体氧化应激活性氧鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒

文档简介主要用途纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过自由基探针鲁米诺和强化剂的参与下，线粒体样品中的活性氧族使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪（Luminometer）的帮助下定量检测样品中活性氧族（过氧化氢）的生成和数量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种生物体线粒体组分的活性氧族的检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradical；O2-）、过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxylradical；OH-）、过氧化基（peroxylradical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxylradical）、氮氧基（nitricOxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitriteanion；ONOO-）次氯酸（hypochlorousacid；HOCl）、半醌自由基（semiquinoneradical）、单线态氧气（singletoxygen）等细胞内活性氧族（ReactiveOxygenSpecies；ROS）的产生和增多，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。线粒体是真核细胞的膜性细胞器，是产生活性氧、进行氧化还原反应的重要场所。鲁米诺（luminol），又称氨基邻苯二甲酰肼（luminol；3-aminophthalichydrazide5-amino-2,3-dihvdro-1,4-phthalazinedione），是一种脂溶性的发光剂，氧化后生成鲁米诺自由基而化学发光，具有460nm左右峰值的带状光谱，肉眼可观察到鲜明的紫蓝色。鲁米诺以单价氧化形式与超氧自由基阴离子反应，产生不稳定性内过氧化物或二氧环丁烷（Dioxetane），由此分解成电激发状态，通过释放光子，回复到基态。鲁米诺作为探针，可以检测线粒体中过氧化氢、超氧自由基阴离子和羟自由基，其中过氧化氢Z强，其发光强度与过氧化氢水平成正相关。产品内容清理液（ReagentA）毫升强化液（ReagentB）毫升发光液（ReagentC）毫升产品说明书1份保存方式保存强化液（ReagentB）和发光液（ReagentC）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于样品操作的容器恒温水槽：用于样品孵育微型台式离心机：用于去除样品杂质测试管或黑色96孔板：用于发光检测用的容器化学发光仪：用于检测化学发光实验步骤样品预处理移取100微升新鲜制备（2小时内）的纯化线粒体（400微克线粒体蛋白）到预冷的1.5毫升离心管，置于冰槽里加入xx微升清理液（ReagentA），轻轻混匀线粒体放进37℃恒温水槽孵育10分钟加入10微升用户自备的待测药品即刻进入下列测读操作测读测读开始前，打开化学发光仪，设定仪器内温度为37℃预热和整合测读10秒或15分钟；然后关掉实验室的灯光。将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化，严格置于暗室里。然后进行下列操作。准备好测试管，做好标记：阴性对照、样品本底和样品活性移取xx微升清理液（ReagentA）到阴性对照测试管移取400微升上述预处理的待测线粒体到样品本底测试管移取400微升上述预处理的待测线粒体到样品活性测试管分别加入xx微升强化液（ReagentB）到上述测试管，除样品本底测试管外分别加入xx微升发光液（ReagentC）到上述测试管，除样品本底测试管外轻轻涡旋混匀即刻放进37℃化学发光仪里测读整合测读10秒，获得相对发光单位（relativelightunit；RLU）或者整合测读15分钟，获得光电子读数：X106CPM（countedphotonperminute）（注意：可以使用液体闪烁仪替代）计算ROS水平：注意事项本产品为50次操作操作时，须戴手套测试前，线粒体分离后2小时内为**线粒体悬液须在4℃温度下保存备用如果测定体系变化，则试剂用量相应变化系统操作过程中，阴性对照只需测定一次测读的所有步骤均须在暗室里进行如果是注射式化学发光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗化学发光仪注射（injector）管道本公司提供系列活性氧分析试剂产品质量标准本产品经鉴定性能稳定本产品经鉴定检测敏感