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植物黄烷酮-3-羟化酶试剂盒说明书

上海铭博生物科技有限公司 2018-11-08
文档简介植物黄烷酮-3-羟化酶(Flavanone-3-hydroxylase;F3H)活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途植物黄烷酮-3-羟化酶(Flavanone-3-hydroxylase;F3H)活性酶连续反应光度法定量检测试剂是一种旨在使用黄烷酮-3-羟化酶、琥珀酸辅酶A合成酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统,伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反应,即采用光度法测定其氧化后峰值(NADH浓度)的变化,以此进行测算单位酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种植物组织,包括种子(seed)、叶片(leaf)、根(root)、胚胎叶(cotyledon)、上胚轴(epicotyl)等黄烷酮-3-羟化酶的活性检测。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。技术背景黄烷酮-3-羟化酶(Flavanone-3-hydroxylase;F3H;EC1.14.11.9),又称为黄烷酮-3-双加氧酶(Flavanone-3-dioxygenase),全称为黄烷酮-2-酮戊二酸:氧分子氧化还原酶(3-羟基化)(flavanone-2-oxoglutarate:oxygenoxidoreductase(3-hydroxylating)),属于氧化还原酶家族中一员,为可溶性非亚铁血红素性含铁2酮戊二酸依赖性双加氧酶(2-oxo-glutaratedependentdioxygenase;2-ODD),单体蛋白,催化黄烷酮,例如2S柚皮素(2Snaringenin)的立体选择性羟基化反应(stereospecifichydroxylation)为2R,3R二氢黄酮醇类(dihydroflavonol),例如2R,3R二氢山柰酚(2R,3Rdihydrokaempferol;DHK),是生物合成黄酮类、花青素(anthocyanidins)、儿茶素(catechins)等化合物的关键步骤,,从而调节类黄酮通路。基于底物柚皮素受到黄烷酮-3-羟化酶的催化,获得氧化,同时分解2-酮戊二酸,产生二氢山柰酚和琥珀酸,进而通过琥珀酸辅酶A合成酶(SuccinylCoAsynthetase)、丙酮酸激酶(pyruvatekinase;PK)和乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase;LDH)反应系统中,由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD),所产生的峰值变化(340nm),来定量分析黄烷酮-3-羟化酶的活性。其反应系统为:Flavanone-3-hydroxylaseNaringenin+2-oxoglutarate+O2→dihydrokaempterol+succinate+CO2SuccinylCoAsynthetaseSuccinate+CoA+ATP→SuccinylCoA+Pi+ADPpyruvatekinasePhosphoenolpyruvate+ADP→pyruvate+ATPlactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+(高吸收峰)(低吸收峰)产品内容清理液(ReagentA)60毫升裂解液(ReagentB)20毫升缓冲液(ReagentC)20毫升酶促液(ReagentD)400微升反应液(ReagentE)2毫升底物液(ReagentF)2毫升阴性液(ReagentG)1毫升产品说明书1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里,其余的保存在-20℃冰箱里,避免反复冻融;底物液(ReagentF),避免光照,有效保证6月
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