人胃蛋白酶原 2（PG2）操作方法简介

文档简介人胃蛋白酶原2(PG2)操作方法简介广锐生物做更好的身边实验试剂供应专家：Elisa试剂盒、生物试剂、生化试剂、抗体、培养基、标准品|对照品等科研试剂！欢迎来电咨询订购：Elisa试剂盒现货低价！目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中胃蛋白酶原2(PG2)的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胃蛋白酶原2(PG2)水平。用纯化的人胃蛋白酶原2(PG2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胃蛋白酶原2(PG2)，再与HRP标记的胃蛋白酶原2(PG2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃蛋白酶原2(PG2)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人胃蛋白酶原2(PG2)浓度。人胃蛋白酶原2(PG2)操作方法简介操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为90μg/L，60μg/L，30μg/L，15μg/L，7.5μg/L）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。人胃蛋白酶原2(PG2)操作方法简介人胃蛋白酶原2(PG2)操作方法简介