末端脱氧核苷酸转移酶技术应用

文档简介末端脱氧核苷酸转移酶技术应用CAS号：9027-67-2钠钙交换蛋白2NCX2抗体.髓鞘相关糖蛋白a/bMAG-a抗体.神经元特异性烯醇化酶NSE抗体.人生长激素结合蛋白(GHBP)elisa检测技术人酸性磷酸酶(ACP)elisa检测技术人HLAMP-2elisa试剂盒生产囊泡相关膜蛋白1VAMP-1抗体.人基质金属蛋白酶4(MMP-4)elisa检测技术人鸟苷酸交换因子(GEF)elisa检测技术肾上腺髓质素(N端20肽)ADM抗体.末端脱氧核苷酸转移酶技术应用分子量：60000级别：BR来源：大肠杆菌细胞，含有编码牛胸腺末端脱氧核苷转移酶的基因浓度：20u/ul活性定义：是指在37℃、60分钟内将1nmol脱氧核糖核酸掺入多聚核苷酸片段（吸附在DE-81上）所需的酶量酶活性分析混合物：66mM二甲胂酸钾（PH7.2），1mMCoCL2,0.01%(v/v)TritonX-100,10uMoligo(dT)10,1mMdTTP和0.4MBq/ml[3h]-dTTP保存液组分：100mM醋酸钾（PH6.8)、2mMβ-巯基乙醇，0.01%(v/v)TritonX-100和50%(v/v)甘油5×反应缓冲液：1M二甲胂酸钾、125mMTris，0.05%(v/v)TritonX-100，5mMCoCL2(PH7.2,25℃)YZ剂：金属螯合剂、铵、氯化物、碘化物和磷酸盐离子失活：加入EDTA，70℃加热10分钟质量保证：测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染注意：由于含有CoCL2，TdT反应缓冲液不能与下游应用兼容，需采用柱离心法或苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀方法纯化反应混合物，除去CoCL2性状：悬浮液，重组酶。末端转移酶（Terminaltransferase,TdT）是一种无需模板的DNA聚合酶，催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3'羟基端。带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子均可作为TdT的底物。一般操作是：先在载体上打开一单个位点，把它与末端转移酶和某一dNTP（如dATP）一起保温以使添尾，另一待插入的外源DNA片段则用互补的用同法添dNTP（dTTP）用同法添尾。接着使上述两种都接上互补单链尾的DNA片段彼此退火，使形成一杂合载体来转化受体菌。杂合载体中的裂隙或切口可被受全菌所修复。用途：生化研究。催化DNA的3'末端添加同聚物；DNA的3'末端标记保存：-20°C末端脱氧核苷酸转移酶技术应用