GelRed 核酸染料

文档简介产品信息产品名称货号规格保存价格(元)GelRed核酸染料（500μLinwater,10,000X）C1101L1122500μL室温550GelRed是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有独特设计的荧光染料。在游离状态下，GelRed发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，GelRed的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。GelRed与EB有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置。标准的EB滤光片或SYBR滤光片都适用，使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在300nm紫外光附近可得到**激发。GelRed的Zda吸收波长约为518nm，发射波长Zda约为605nm。GelRed与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有YZ作用。另外，GelRed与EB相比，诱变能力大大降低。GelRedZ初由美国Biotium公司研发，艾姆斯试验表明，这种新型染料细胞透过性、诱变性方面表现优异，得到市场广泛认可。运输与保存方法常温运输、保存，保质期24个月。使用方法1．胶染法（用法同EB）（1）制胶时加入GelRed核酸染料（例如：每50mL琼脂糖溶液中加入5μLGelRed10,000×储液，以此比例类推）。（2）按照常规方法进行电泳。注意事项：此方法染色染料用量相对较少，500μL染料大约可以做100块50mL的胶。由于GelRed具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将GelRed储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。GelRed兼容所有常用的电泳缓冲溶液。含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，并长期保存直到使用。此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。2．泡染法（1）按照常规方法进行电泳。（2）用H2O将GelRed10,000×储液稀释约3,300倍到0.1MNaCl中，制成3×染色液。（例如将15μLGelRed10,000×储液和5mL1MNaCl加到45mLH2O中）。（3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中，缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶，室温振荡染色30min左右，**染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。注意事项：1）用泡染法染色时，染料用量较多，单次使用的染色液可重复使用3次左右。3×GelRed染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。2）如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。3）如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度、延长凝胶时间以保证边缘清晰、改进上样技巧或选择泡染法染色。3．预染法（Z省染料的染色方法，按25μL体积上样，500μL原液理论做20万个样品）1）该方法适用于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳2）工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的GelRed原液稀释1000倍，即为10XGelRed工作液。GelRed工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。3）制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。4）样品染色：向分析样品中加入GelRed工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使GelRed与样品中DNA充分结合。GelRed工作液加入量为总上样量的1/10，使GelRed在上样时的终浓度为1X.5）DNAMarker染色：将5μLDNAMarker和1μLGelRed工作液混匀，室温放置5分钟，使GelRed与DNA充分结合。6）上样、电泳：按常规操作。注意事项：根据染料分子量小，带电荷少的特性开发本染色方法，按照一块胶10个样品计算，500μL原液理论上可以完成2万块胶的染色。疑难解答1.在常规用酒精沉淀核酸的过程中，GelRed可以全部从双链核酸上去掉。2.如果想对用GelRed染过的胶进行Southernblots，建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1%-0.3%的SDS。3.在紫外照射透视下，与双链DNA接合的GelRed呈现红色荧光。4.GelRed对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。5.GelRed原液在室温保存，如放置冰箱保存会产生部分沉淀，使用前适当加热并摇匀即可正常使用。几种核酸染料比较名称灵敏度稳定性适用性安全性价格GelRed高高通用大小片段电泳染色美国安全认定无毒中GelGreen高高通用大小片段电泳染色美国安全认定无毒中SYBRGreenI极高差100bp以上片段电泳染色花菁染料，低毒高SYBRGreenII极高差单链核酸分子电泳染色花菁染料，低毒高GoldViewI低高500bp以上片段电泳染色高毒性，强致癌低EB低高100bp以上片段电泳染色强致癌，强诱变低