96T人核转录因子ELISA 检测试剂盒使用的实验方案

文档简介本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆上海信然生物技术有限公司专业供应葡聚糖凝胶HL-20,白介素elisa试剂盒,肿瘤坏死因子elisa试剂盒,人类白介抗原B27,细胞生长因子试剂盒，提供免费代测服务，保证实验结果客观真实性。我公司对试剂盒质量1**%保证，若存在质量问题，我们无条件包退换。试验原理：　　　　NF-κB试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NF-κB浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将NF-κB和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中NF-κB的浓度呈比例关系。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。人核转录因子ELISA检测试剂盒操作注意事项试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。人核转录因子ELISA检测试剂盒操作步骤使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与人其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。人核转录因子ELISA检测试剂盒结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的NF-κB标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的NF-κB含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-8.0umol/L4、敏感度：0.01umol/LHSL/LIPE（hormone-sensitivelipase）荷尔蒙敏感脂肪酶抗体0.2mlHrasls3/HREV107（HRASlikesuppressor3）HRAS样YZ因子3抗体0.2mlHSP-20（HeatShockProtein20）热休克蛋白-20抗体0.1mlGoatanti-RabbitIgG/RBITC罗丹明标记羊抗兔IgG0.3mlGoatanti-mouseIgG/RBITC罗丹明标记羊抗小鼠IgG0.3mlHSP-20（HeatShockProtein20）热休克蛋白-2０抗体0.2mlHSP-27（HeatShockProtein27）热休克蛋白-27抗体0.1mlHSP-27（HeatShockProtein27）热休克蛋白-2７抗体0.2mlHSP-60（Heatshockprotein-60）热休克蛋白-60抗体0.1mlHSP-60（Heatshockprotein-60）热休克蛋白-6０抗体0.2mlHSP47（Heatshockprotein-47）热休克蛋白-47抗体0.2mlRabbitanti-chickenIgG/Gold金标记兔抗鸡IgG（10nm/15nm）0.5mlRabbitanti-chickenIgG/Gold金标记兔抗鸡IgG（10nm/15nm）1mlRabbitanti-chickenIgM/Gold金标记兔抗鸡IgM（10nm/15nm）2mlHSP-70（Heatshockprotein-70）热休克蛋白-70抗体0.1mlHSP-70（Heatshockprotein-70）热休克蛋白-7０抗体0.2mlHSP75/TRAP-1（HeatShockProtein75）热休克蛋白-75抗体0.2mlHSP-90α（HeatShockProtein90α）热休克蛋白90α抗体0.1mlHSP-90α（HeatShockProtein90α）热休克蛋白9０α抗体0.2mlHSP-90β（heatsockprotein-90β）热休克蛋白-90β抗体0.1mlRabbitanti-dogIgG/Gold金标记兔抗狗IgG（10nm/15nm）2mlHSP-90β（heatsockprotein-90β）热休克蛋白-9０β抗体0.2ml若需要了解试剂盒的详细信息，请来电咨询：联系人：张经理电话：021-60514052，021-60514051，61845661传真：021-61845661手机：18939846276，13482524164