ELISA法在梅毒检测中的临床意义

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梅毒是一种性传播疾病,近几年来在我国的发病率呈明显的上升趋势。当前我国实验室诊断梅毒常用TRUST或快速血浆反应素试验（RPR）筛选后再用TPPA或螺旋体血球凝集试验（TPHA）等确证。前类试验有较高的生物学假阴性和假阳性，后类试验则成本高、不能自动化、结果判断受主观影响。重组抗原ELISA是近年发展检测梅毒的方法，具有敏感性高、特异性好、自动化程度高、易于标准化等优点，本实验研究应用其对临床检测进行评价，现报告如下。1材料和方法　　1.1.1临床标本均来自广东惠州市ZX人民医院，包括性病门诊124例梅毒血清，其中24例为一期梅毒、28例为早期潜伏梅毒、72例为二期梅毒，各期梅毒的诊断按标准方法进行［2］。59例门诊病人（其中19例类风湿关节炎、40例慢性乙型肝炎），172例献血员血清由血站提供。1.1.2试剂TRUST试剂盒（上海诺泰ZG生物技术有限公司）；TPPA试剂盒（美国诺泰生物技术有限公司）；重组抗原ELISA试剂盒（双抗原夹心）（上海伊丽萨生物科技有限公司）。1.1.3方法所有血清TRUST试剂盒、重组抗原ELISA试剂盒、TPPA试剂盒。试剂盒操作均在有效期之内，严格按说明书进行。TRUST和TPPA目测观察结果；ELISA结果用酶标仪测光密度（OD值），以cutoff值为界判断结果。2结果　　3种血清学方法检测355份血清白标本的结果得知，ELISA和TPPA均为阳性的24例一期梅毒和28例早期潜伏梅毒中，TRUST分别为4例和3例阴性，而ELISA和TPPA均为阴性的类风湿患者的TRUST有4例为假阳性。TRUST和ELISA的敏感性、特异性分为92.7%（115/124）、98.3%（227/231）和1**%（124/124）、99.1%（229/231）。TRUST与TPPA的符合率为96.3%（342/355）。ELISA与TPPA的符合率为99.4%（353/355）。3讨论梅毒（Syphilis）是由苍白螺旋体（TreponemaPallidum,TP）所引起的一种严重危害人类健康的性传播疾病，近年来在我国有逐年上升趋势。选择好的检测方法，可以有效的尽快对梅毒进行ZL和预防。在我国当前大多数单位仍然采用检测非特异性抗体（如TRUST、RPR）作为梅毒初筛，阳性者再用检测特异性抗体（如TPPA、TPHA）作确诊。非特异性的检测试剂成本低、操作简便，结果易读，常用于梅毒的初筛，但其检测的是非特异性的抗心磷脂抗体，易受许多因素的影响，对于其他一些非梅毒者如红斑狼疮、类风湿自身免疫性疾病、孕妇等易产生生物学假阳性，及人工假阳性［1］，特异性低。在本研究中，有4例TRUST为阳性的标本经TPPA确定为假阳性；此外，抗心磷脂抗体在梅毒的非活动期和ZL后易消失，对隐性梅毒早期或晚期梅毒和ZL后梅毒的敏感性低［2］，造成假阴性而漏诊，本研究中一期、隐性梅毒共有8例TRUST阴性而TPPA为阳性，表明单靠检测非特异性抗体来筛查梅毒易造成漏检，给健康人群带来潜在的危害，应引起检测单位的足够重视。TPPA采用梅毒螺旋体天然抗原作为诊断抗原，有很高的特异性，采用间接凝集反应的原理，敏感性高，作为确证试验在世界许多国家被广泛使用，但梅毒螺旋体至今不能体外人工培养，抗原来源困难，因而TPPA试剂盒成本高，此外，TPPA测定包括多次吸液过程，会造成操作者出错的风险［3］，还有该方法结果都依赖于操作者肉眼来判断和解释，结果不易保存。并且，先初筛再进行确诊操作烦琐。近年来，随着梅毒螺旋体全基因序列的解析，通过基因工程途径生产重组蛋白抗原或多肽作为抗原，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）将TP重组抗原包被在微孔测定板上，使试剂盒成本大大降低，重组抗原特异性高、纯度高，多种重组抗原联合使用可得到更高的敏感性和特异性，结合ELISA双抗原夹心法，使重组抗原双抗体夹心法ELISA试剂盒具有高度特异、灵敏、能自动化、标准化等优点，尤其适用于大样本的测定。本实验中，在总共355份标本中，ELISA假阳性仅2份，无漏检，以TPPA结果为参照，ELISA的敏感性、特异性为1**%、99.1%，表明ELISA与TPPA有良好的相关性；而TRUST的敏感性、特异性为92.7%、98.3%，ELISA敏感性和特异性均高于TRUST。国内外的研究也表明，梅毒-ELISA是目前检测梅毒的一种良好方法。　　总之，双抗原夹心ELISA法具有敏感性高，特异性好，能自动化，判断结果客观准确，成本低，操作简便等优点，是一种集筛查和确诊为一体的检测梅毒的好方法，应该在临床检测方面进行推广，普遍使用。【参考文献】　　［1］叶应抚.全国临床检测操作规程［M］.第2版.南京：东南大学出版社，1997,432.　　［2］杨文林，杨健，刘丹莹,等.早期梅毒ZL前后血清学分析［J］.临床皮肤科杂志，1998，27（5）：314.［3］龚匡隆.梅毒血清学试验的内部质量控制［J］.ZG皮肤性病学杂志，1997，11（1）：31.阅读延伸：ELISA法与TRUST法在梅毒检测中的比较梅毒是一种广泛流行的性病，近年来在ZG发病率又有所回升。梅毒螺旋体（TreponemaPallidun）是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体。检测梅毒螺旋体的方法有快速血浆反应素卡片试验（RPR）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）。RPR法和TRUST法为非特异性血清试验，敏感性及特异性较差，肉眼判断结果易受检测者的主观性影响，易出现漏检和误判。下面采用梅毒螺旋体酶联免疫试验（TP-ELISA）与TRUST法进行比较，实验过程和结果报告如下

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梅毒是一种性传播疾病,近几年来在我国的发病率呈明显的上升趋势。当前我国实验室诊断梅毒常用TRUST或快速血浆反应素试验（RPR）筛选后再用TPPA或螺旋体血球凝集试验（TPHA）等确证。前类试验有较高的生物学假阴性和假阳性，后类试验则成本高、不能自动化、结果判断受主观影响。重组抗原ELISA是近年发展检测梅毒的方法，具有敏感性高、特异性好、自动化程度高、易于标准化等优点，本实验研究应用其对临床检测进行评价，现报告如下。1材料和方法　　1.1.1临床标本均来自广东惠州市ZX人民医院，包括性病门诊124例梅毒血清，其中24例为一期梅毒、28例为早期潜伏梅毒、72例为二期梅毒，各期梅毒的诊断按标准方法进行［2］。59例门诊病人（其中19例类风湿关节炎、40例慢性乙型肝炎），172例献血员血清由血站提供。1.1.2试剂TRUST试剂盒（上海诺泰ZG生物技术有限公司）；TPPA试剂盒（美国诺泰生物技术有限公司）；重组抗原ELISA试剂盒（双抗原夹心）（上海伊丽萨生物科技有限公司）。1.1.3方法所有血清TRUST试剂盒、重组抗原ELISA试剂盒、TPPA试剂盒。试剂盒操作均在有效期之内，严格按说明书进行。TRUST和TPPA目测观察结果；ELISA结果用酶标仪测光密度（OD值），以cutoff值为界判断结果。2结果　　3种血清学方法检测355份血清白标本的结果得知，ELISA和TPPA均为阳性的24例一期梅毒和28例早期潜伏梅毒中，TRUST分别为4例和3例阴性，而ELISA和TPPA均为阴性的类风湿患者的TRUST有4例为假阳性。TRUST和ELISA的敏感性、特异性分为92.7%（115/124）、98.3%（227/231）和1**%（124/124）、99.1%（229/231）。TRUST与TPPA的符合率为96.3%（342/355）。ELISA与TPPA的符合率为99.4%（353/355）。3讨论梅毒（Syphilis）是由苍白螺旋体（TreponemaPallidum,TP）所引起的一种严重危害人类健康的性传播疾病，近年来在我国有逐年上升趋势。选择好的检测方法，可以有效的尽快对梅毒进行ZL和预防。在我国当前大多数单位仍然采用检测非特异性抗体（如TRUST、RPR）作为梅毒初筛，阳性者再用检测特异性抗体（如TPPA、TPHA）作确诊。非特异性的检测试剂成本低、操作简便，结果易读，常用于梅毒的初筛，但其检测的是非特异性的抗心磷脂抗体，易受许多因素的影响，对于其他一些非梅毒者如红斑狼疮、类风湿自身免疫性疾病、孕妇等易产生生物学假阳性，及人工假阳性［1］，特异性低。在本研究中，有4例TRUST为阳性的标本经TPPA确定为假阳性；此外，抗心磷脂抗体在梅毒的非活动期和ZL后易消失，对隐性梅毒早期或晚期梅毒和ZL后梅毒的敏感性低［2］，造成假阴性而漏诊，本研究中一期、隐性梅毒共有8例TRUST阴性而TPPA为阳性，表明单靠检测非特异性抗体来筛查梅毒易造成漏检，给健康人群带来潜在的危害，应引起检测单位的足够重视。TPPA采用梅毒螺旋体天然抗原作为诊断抗原，有很高的特异性，采用间接凝集反应的原理，敏感性高，作为确证试验在世界许多国家被广泛使用，但梅毒螺旋体至今不能体外人工培养，抗原来源困难，因而TPPA试剂盒成本高，此外，TPPA测定包括多次吸液过程，会造成操作者出错的风险［3］，还有该方法结果都依赖于操作者肉眼来判断和解释，结果不易保存。并且，先初筛再进行确诊操作烦琐。近年来，随着梅毒螺旋体全基因序列的解析，通过基因工程途径生产重组蛋白抗原或多肽作为抗原，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）将TP重组抗原包被在微孔测定板上，使试剂盒成本大大降低，重组抗原特异性高、纯度高，多种重组抗原联合使用可得到更高的敏感性和特异性，结合ELISA双抗原夹心法，使重组抗原双抗体夹心法ELISA试剂盒具有高度特异、灵敏、能自动化、标准化等优点，尤其适用于大样本的测定。本实验中，在总共355份标本中，ELISA假阳性仅2份，无漏检，以TPPA结果为参照，ELISA的敏感性、特异性为1**%、99.1%，表明ELISA与TPPA有良好的相关性；而TRUST的敏感性、特异性为92.7%、98.3%，ELISA敏感性和特异性均高于TRUST。国内外的研究也表明，梅毒-ELISA是目前检测梅毒的一种良好方法。　　总之，双抗原夹心ELISA法具有敏感性高，特异性好，能自动化，判断结果客观准确，成本低，操作简便等优点，是一种集筛查和确诊为一体的检测梅毒的好方法，应该在临床检测方面进行推广，普遍使用。【参考文献】　　［1］叶应抚.全国临床检测操作规程［M］.第2版.南京：东南大学出版社，1997,432.　　［2］杨文林，杨健，刘丹莹,等.早期梅毒ZL前后血清学分析［J］.临床皮肤科杂志，1998，27（5）：314.［3］龚匡隆.梅毒血清学试验的内部质量控制［J］.ZG皮肤性病学杂志，1997，11（1）：31.阅读延伸：ELISA法与TRUST法在梅毒检测中的比较梅毒是一种广泛流行的性病，近年来在ZG发病率又有所回升。梅毒螺旋体（TreponemaPallidun）是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体。检测梅毒螺旋体的方法有快速血浆反应素卡片试验（RPR）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）。RPR法和TRUST法为非特异性血清试验，敏感性及特异性较差，肉眼判断结果易受检测者的主观性影响，易出现漏检和误判。下面采用梅毒螺旋体酶联免疫试验（TP-ELISA）与TRUST法进行比较，实验过程和结果报告如下[详细]
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