人5（5-HT）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

文档简介人5（5-HT）酶联免疫分析试剂盒使用说明书人5(5-HT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书检测范围：96T80ng/L-2400ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人尿液及相关液体样本中5(5-HT)含量。人5(5-HT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人5(5-HT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入5与HRP标记的5(5-HT)抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的5(5-HT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光(5-HT)。用纯化的人(5-HT)，再度（OD值），通过标准曲线计算样品中人5(5-HT)浓度。1.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l，待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。2.温育：用封板膜封板后37℃温育30分钟。3.配液：将30倍浓30倍稀释后备用4.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静重复5次，拍干。30秒后弃去，重复5次，拍干。5.加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外。6.温育：操作同2。7.洗涤：操作同4。8.显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。9.终止：每孔加终止液50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。10.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。人5(5-HT)酶联免疫分析试剂盒使用说明书注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有析出，稀释时可在浴中加温助溶，洗涤时不影响。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验。8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月。