ELISA实验常见问题

文档简介异常：白板结果描述：显色步骤结束后酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。原因分析：试剂已过有效期，或不同试剂盒组分混用，检查试剂的组分及批号，确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。对策：不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用。整板的黄板现象可能是由于错加其他试剂造成，如同时操作两对半试剂时，测HbsAb板用于测HBsAg等；实验前检查试剂的组分及批号，确认所有组分均属于对应的试剂盒。如盛标本的试管四周常有血痂，易脱落，应远离酶标板。Elisa试剂盒超过有效期的产品可能会产生很弱的信号；试剂盒没有按规定进行留存，受高温影响；实验前检查试剂的组分及批号，确认试剂未过期。孵育温度应控制在37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作，保温期内不宜多开门，以免影响保温。花板，一般是由于临床标本的收集、处理和留存方法不当造成，放置时间（自然放置1~2h）及离心转（3000r/min）、离心时间（15min）应引起注意。试剂、样品用前未平衡至室温从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡，20分钟左右。错加、漏加试剂底物、显色剂A或B严格按说明书的步骤操作，加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象。实验结束后，阴阳性对照正常，质控正常，但临床标本感觉显色较弱，待测标本中可能不含强阳性标本，故结果可能是正常的，如有怀疑，可复检标本加入叠氮钠作为防腐剂，酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂，可选用proclin、硫柳汞等其他防腐剂，阴阳性对照正常，但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用酶标对吸头的污染以及对盛放显色剂容器的污染都易造成黄板现象；避免试剂组分间的交叉污染，确保吸头、容器的干净，显色剂在光照条件下放置过久，实验前已变蓝，显色剂A、B未使用前避光留存，孵育温度过高或孵育时间过长；孵育温度应控制在37-38℃，孵育时间严格按照说明书操作。标本在一周内使用的，可存于2-8℃，如需长期留存，应置于-20℃以下留存。不要将ELISA试剂盒长时间置于常温下，按使用规定储藏。出现随机性的花板、跳孔现象样品离心不完全，反应孔内发生凝血或残留细胞成分；充分离心，3000rpm6分钟以上。仪器设定不正确，滤光片不匹配，重新设定酶标仪的参数，特别是检查滤光片是否匹配，灵敏度过高、板底高、高背景终止后，整板结果显现均一的黄色或淡黄色；或阴阳性对照、质控正常，标本阴性标本，OD值过高。特别是洗涤时每孔未注满洗液，易造成花板黄板现象，严格按说明书要求洗板。洗板及加样过程中，酶标受污染失活失去催化显色剂显色的能力，确认盛酶标的容器不含酶YZ剂如叠氮钠等，确认配制洗液的容器已洗干净。加样时交叉污染；加标本时尽量避免交叉污染。