牛免疫球蛋白G（IgG）说明书间接法

文档简介www.biokanu.com牛免疫球蛋白G(IgG)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。使用目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中免疫球蛋白G(IgG)的含量。实验原理本试剂盒应用间接法测定标本中牛免疫球蛋白G(IgG)水平。用纯化的牛免疫球蛋白G(IgG)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的免疫球蛋白G(IgG)标准品和未知浓度的促黄体激素(LH)待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白G(IgG)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛免疫球蛋白G(IgG)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶8标准品S1（24μg/ml）0.5ml×1瓶2链霉亲和素-HRP6ml×1瓶标准品S2（16μg/ml）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条标准品S3（8μg/ml）0.5ml×1瓶4生物素标记的抗-IgG抗体6ml×1瓶标准品S4（4μg/ml）0.5ml×1瓶5显色剂A液6ml×1瓶标准品S5（2μg/ml）0.5ml×1瓶6显色剂B液6ml×1/瓶9说明书1份7终止液6ml×1瓶10封板膜2张标本要求1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融操作步骤根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl，在样本反应孔中加入50微升样本，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复4次，拍干。加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟洗涤：操作同4。加链霉亲和素-HRP：每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。洗涤：操作同4。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以稀释倍数（×5×n）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。线形范围：1.5μg/ml-30μg/ml规格：96人份/盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月