小鼠16α羟基雌酮1（16-α OHE-1）试剂盒使用方法

文档简介检测范围：96T20ng/L-700ng/L使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中16α羟基雌酮1(16-αOHE-1)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠16α羟基雌酮1(16-αOHE-1)水平。用纯化的小鼠16α羟基雌酮1(16-αOHE-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入16α羟基雌酮1(16-αOHE-1)，再与HRP标记的16α羟基雌酮1(16-αOHE-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的16α羟基雌酮1(16-αOHE-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠16α羟基雌酮1(16-αOHE-1)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（1200ng/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。600ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液300ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液150ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液75ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液37.5ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。