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96T人脱氧核糖核酸酶ⅠELISA检测试剂盒

研域(上海)化学试剂有限公司 2018-09-19
文档简介人脱氧核糖核酸酶ⅠELISA检测试剂盒            本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆试验原理:    DNase-Ⅰ试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知DNase-Ⅰ浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将DNase-Ⅰ和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中DNase-Ⅰ的浓度呈比例关系。自备材料蒸馏水。加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。振荡器及磁力搅拌器等。安全性避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。人脱氧核糖核酸酶ⅠELISA检测试剂盒操作注意事项试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。人脱氧核糖核酸酶ⅠELISA检测试剂盒操作步骤使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。试剂盒性能1.灵敏度:Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性:不与其它细胞因子反应。3.重复性:板内、板间变异系数均小于10%。人脱氧核糖核酸酶ⅠELISA检测试剂盒结果判断与分析1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的DNase-Ⅰ标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的DNase-Ⅰ含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围:0-800nmol/L4、敏感度:1.0nmol/LApo-a1/ApoA1(ApolipoproteinA-1;APOA1protein)载脂蛋白A1抗体0.1mlApo-a1/ApoA1(ApolipoproteinA-1;APOA1protein)载脂蛋白A1抗体0.2mlPhospho-c-Kit(Tyr719)磷酸化原癌基因c-kit抗体0.1mlFASE(fattyacidsynthase,FASN)抗脂肪酸合成酶抗体0.2mlFASTkinase(Fas-activatedserine/threoninekinase)抗Fas活化的丝/苏氨酸激酶抗体0.2mlFasLFasL抗体0.1mlFasLFasL抗体0.2mlFcγRⅡA/CD32a(lowaffinityimmunoglobu领ammaFcregionreceptorII-aisoform1)免疫球蛋白GFc段受体Ⅱ抗体0.2mlFBN1(fibrillin1)原纤维蛋白1抗体0.1mlFBN1(fibrillin1)原纤维蛋白1抗体0.2mlPhospho-CD19(Tyr531)磷酸化CD19抗体0.1mlPhospho-Bcr(Tyr177)磷酸化T淋巴细胞受体抗体0.1mlPhospho-cdc2(Thr14)磷酸化周期素依赖激酶2抗体0.1mlFDC-SP/ADC(Folliculardendriticcellsecretedprotein)滤泡树突细胞分泌蛋白抗体0.2mlFe65proteinFe65蛋白抗体0.1mlFe65proteinFe65蛋白抗体0.2mlFGF1/aFGF/ECGF-beta/HBGF-1肝素结合生长因子/酸性成纤维细胞生长因子抗体0.1mlFGF1/aFGF/ECGF-beta/HBGF-1肝素结合生长因子/酸性成纤维细胞生长因子抗体0.2mlPhospho-cdc2(Thr161)磷酸化周期素依赖激酶2抗体0.1mlPhospho-cdc2(Thr506)磷酸化细胞分裂周期蛋白25抗体0.1mlPhospho-cdc2(Ser76)磷酸化细胞分裂周期蛋白25抗体0.1mlFGF3/OncogeneINT2(FibroblastGrowthFactor3)纤维母细胞生长因子3抗体0.1mlFGF3/OncogeneINT2(FibroblastGrowthFactor3)纤维母细胞生长因子3抗体0.2ml
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