二胺氧化酶（DAO）ELISA试剂盒实验通用规则

文档简介二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒检测原理：本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人DAO抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的DAO会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人DAO抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人DAO抗体与结合在包被抗体上的人DAO结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，DAO浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中DAO的浓度。二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒实验通用规则：1、要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%.可用水和电子天平进行确定。但**有专业人员进行矫正。2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后，要更换枪头。即使是吸取标准品时。3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使各种试剂都恢复到室温，以使结果更稳定。4、实验时，要使底物避光保存。5、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。6、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。7、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。8、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。9、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。10、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加彻底。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。11、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。12、底物是光敏感的，要在临用前现配医`学教育网搜集整理。13、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。14、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。15、待检样品要澄清，否则会影响结果。16、温浴时间应遵守试剂盒规定。17、应尽量做双孔实验，这样才能保证数据的准确性。18、对结果有疑问的样品要用其它方法进行确证。二胺氧化酶(DAO)ELISA试剂盒标本收集：血清：全血标本于室温放置2小时或4℃夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。血浆：抗凝剂推荐使用EDTA，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃电冰箱内，避免反复冻融，6个月内进行检测,4℃保存的应在1周内进行检测。如果样本中检测物浓度高于标准品Z高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。