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豚鼠白介素12(IL-12)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

研域(上海)化学试剂有限公司 2018-09-14
文档简介豚鼠白介素12(IL-12)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围:96T5.0ng/L-120ng/L使用目的:本试剂盒用于测定豚鼠血清、血浆及相关液体样本中白介素12(IL-12)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中豚鼠白介素12(IL-12)介素12(IL-12)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素12IL-12),再与HRP标记的白介素12(IL-12)抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,。用纯化的豚鼠白经过彻底洗涤后加底物TB显色。TB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素12(IL-12)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中豚鼠白介素12(IL-12)浓度。试剂盒组成30倍浓20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶终止液6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份2酶标试剂标准品(240ng/L)标准品稀释液3酶标包被板4样品稀释液5显色剂A液6显色剂B液10说明书11封板膜12密封袋2张1个标本要豚鼠白介素12(IL-12)酶联免疫分析试剂盒使用说明书1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。120ng/L60ng/L30ng/L5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液15ng/L7.5ng/L2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后37℃温育30分钟。30倍稀释后备用配液:将30倍浓洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静重复5次,拍干。30秒后弃去,如此加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总:计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项豚鼠白介素12(IL-12)酶联免疫分析试剂盒使用说明书1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有析出,稀释时可在浴中加温助溶,洗涤时不影响。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月
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