人Nesfatin定量EIA试剂盒使用说明说明书

文档简介电话：021-6533363955229872网址：http://www.westang.com人Nesfatin定量EIA试剂盒使用说明原理本实验采用双抗体夹心ELISA法。用抗人Nesfatin单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的Nesfatin与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在450nm处测OD值，Nesfatin浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Nesfatin浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）6ml标准品（Standards）：6瓶一套20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml封板纸一张底物工作液（TMBSolution）12ml坐标纸一张终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。2.标准品**次使用时用0.5ml的蒸馏水溶解，放置半小时混匀后使用，用后放在-20oC保存。溶解后浓度分别为14、8、3.2、1.6、0.8、0ng/ml。3.标本如果需要稀释可以用蒸馏水稀释。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.建立标准曲线：设标准孔6孔，每孔各加入标准品50ul。2.加样：待测品孔每孔各加入待测样品50ul。3.每孔加酶标抗体工作液50ul。将反应板置37℃120分钟。（室温过夜可以提高灵敏度）4.洗板：同前。5.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。6.每孔加入100ul终止液混匀。7.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品14、8、3.2、1.6、0.8、0ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应Nesfatin含量。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的Nesfatin检测浓度小于0.4ng/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人Nesfatin。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！