人Lactoferrin定量EIA试剂盒使用说明说明书

文档简介电话：021-6533363955229872网址：http://www.westang.com人Lactoferrin定量EIA试剂盒使用说明原理本实验采用双抗体夹心ELISA法。用抗人Lactoferrin单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的Lactoferrin与单抗结合，加入酶标抗体，形成免疫复合物连接在板上，加入酶底物TMB，出现蓝色，加终止液硫酸，颜色变黄，在450nm处测OD值，Lactoferrin浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中Lactoferrin浓度。试剂盒组成（2-8℃保存）酶标板（CoatedWells）96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate）12ml10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：1ug/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml封板纸一张终止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA、肝素抗凝）、细胞培养上清液、尿液等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，避免反复冻融。血清或血浆测定前用标本稀释液至少作1：100稀释（取20ul，加标本稀释液180ul,稀释10倍）。脑脊液或尿液可以不做稀释。乳汁做1：10万倍稀释。2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成1000ng/ml的溶液。设标准管8管，**管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在**管中加入1000ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃60分钟。2.洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。。3.每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。4.洗板：同前。5.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应15分钟。6.每孔加入100ul终止液混匀。7.30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。结果计算与判断1.所有OD值都应减除空白值后再行计算。2.以标准品100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。3.根据样品OD值在该曲线图上查出相应Lactoferrin含量，再乘上稀释倍数即可。试剂盒性能1.灵敏度：Z小的Lactoferrin检测浓度小于1ng/ml。2.特异性：可同时检测重组或天然的人Lactoferrin。不与人其它细胞因子有交叉反应。3.重复性：板内、板见变异系数均小于10％。注意事项1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。2.洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致极ng确度误差及OD值错误地升高。3.板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！