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如何为每个患者打造CAR-T细胞产品?

洛阳吉恩特生物科技有限公司 2023-06-27

    CAR-T疗法的基本原理并不难理解,即是通过基因转染的方式将从患者或健康供体外周血中收集来的T细胞加以改造,使之表达能够靶向肿瘤细胞的“导航装置”——嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor,CAR),等这些升级改造后的“超级战士”在体外扩增到足够的规模,再输回患者体内通过免疫作用消灭肿瘤达到治果。

    这套流程说起来简单,但其中的每个步骤都涉及复杂的制造工艺和过程。比如***步T细胞的收集,如果这一步所得的T细胞纯度不够,比如混入了B细胞,将会导致患者对CAR-T疗法产生抗性。另一个上文没有提到的步骤,是在回输CAR-T细胞之前,需要对患者进行淋巴细胞清除化疗,若清除不够彻底,也将影响疗效。

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图1 CAR-T疗法流程

     CAR-T细胞生产过程中,还有一个关键但较少被谈及的步骤,就是T细胞的激活,它对CAR-T细胞转导效率、扩增速率和分化都有影响。CAR-T细胞转导效率决定了其能否***识别肿瘤细胞,CAR-T细胞在体内的扩增能力将决定疗效是否持,分化成CD4+ T细胞与CD8+ T细胞的比率也会***治疗的成功。

这一步骤实际上是通过人工手段模拟了T细胞发育的自然进程。T细胞的激活需要两个独立的信号,其一来自于T细胞受体(TCR-CD3复合物),其二来自于T细胞表面的共刺激分子(如CD28)。自然条件下,这些信号由体内的抗原呈递细胞(Antigen-presenting cells,APC)递送,而CAR-T细胞生产过程中,使用人工APC将更为有效。人工APC甚至可能不是细胞,比如涂有抗体的磁珠。目前,CD3/CD28抗体偶联磁珠,例如Dynabeads,是用于T细胞激活的***常用平台之一。

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图2 T细胞激活的两大信号

      然而,Dynabeads总是以固定的方式呈现抗CD3和抗CD28,且呈现密度超过生理水平,研究表明这将使T细胞过度刺激和“疲惫”(exhaustion)。Dynabeads按特定的珠子:细胞比例的给药方式,也***了精确调节T细胞激活***信号和第二信号刺激剂量的可能性。

      另外,癌症患者的T细胞和健康供体的T细胞之间也存在差异,即便面对相同的刺激水平,也会得到不同的结果。如何根据采集所得的T细胞样本的状态,精确调节激活信号的刺激剂量,使得CAR-T细胞产品达到***优功效,也有待进一步的研究。

       为此,哈佛大学Wyss生物启发工程研究所David Mooney博士领导的团队在2020年开发了一款可生物降解的APC模拟支架(APC-mimetic scaffolds,APC-ms),以高精度剂量和更接近生理的方式提供刺激。

       在近发表于Nature Communications的***新研究“Enhancing CAR-T cell functionality in a patient-specific manner”中,研究团队提出了一个根据初始血液样本中T细胞属性来预测***佳刺激剂量的模型。

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图4 研究成果

       研究人员从8名健康供体、6名高危急性淋巴细胞白血病(ALL)患者和4名慢性淋巴细胞性淋巴瘤(CLL)患者的血液样本中分离T细胞,并分析了这些T细胞的表型。随后,他们利用APC-ms为T细胞提供不同剂量的抗CD3/抗CD28刺激,并与使用Dynabeads提供刺激的常规方法进行比较。

      结果发现,源自患者的T细胞血液样本包含更多的CD8+ T细胞。当使用常规刺激剂量时,癌症患者的T细胞相比健康供体的T细胞更容易出现过度刺激,失去应有功能,且降低增殖能力,且癌症患者的T细胞对刺激剂量的提高更为敏感。

      DNA提取是分析农作物分子生物学性状的重要步骤,现阶段,常用的DNA提取技术有磁珠法和离心柱法,使用磁珠进行农作物的DNA提取,可以实现高通量、自动化的操作。由于磁珠对核酸的吸附灵敏度高,只需要少量的叶片或其他组织即可得到高得率、高纯度的DNA。吉恩特生物采用自主研发生产的纳米生物磁珠和磁珠法DNA提取试剂盒,可以从各种类型的农作物中提取高质量的核酸,配合核酸提取仪,可以达到快速自动化提取的目的。


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