前沿 | 有望克服“现货型”细胞疗法瓶颈，加州大学团队发现阻止免疫排斥新策略

在器官移植中，将抗体介导的移植物排斥反应（AMR）作为异体移植失败的主要原因已得到广泛认可。随着近年来细胞治 疗的发展，越来越多的研究者聚焦在现货型同种异体产品的开发，这样就面临一个问题：这些异体细胞移植物会诱导机体产生特异性anti-HLA抗体并经历某种形式的抗体介导的杀伤（ADCC/CDC），从而影响细胞治 疗药物的疗 效[1]。另外自体细胞治 疗产品CAR-T也会诱导机体产生anti-CAR IgG抗体[2]，这些抗体很大程度上会影响CAR-T的增殖与功能。

新年伊始，加利福尼亚大学的科学家在Nature Biotechnology上发表了题为“Protection of cell therapeutics from antibody-mediated killing by CD64 overexpression”的研究结果，提出一种可以有效保护细胞疗法免受抗体介导杀伤的基因工程改造方法。

科学家利用CD64或截短的CD64t捕获抗体IgG并占据其Fc，有效避免抗体介导的细胞杀伤ADCC和CDC。研究者将该方法应用在三种相关疾病模型中，CD64t表达的细胞完全避免了抗体介导的杀伤：

1、epiCsTPO,CD64t细胞

桥本氏甲状腺病是一种自身免疫性甲状腺炎，自身抗体将导致甲状腺组织被破坏。抗甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体在90% 的患者中以高浓度存在并介导ADCC和CDC损害甲状腺的功能。

人甲状腺上皮细胞（epiCs）转导TPO表达，再转导其过表达CD64t。相比于未改造的epiCsTPO，改造后的epiCsTPO, CD64t在ADCC和CDC检测中得到了充分的保护并得以存活

2、胰岛β cellsCD64t

1型糖尿病（T1DM）是另一种自身免疫性疾病，由T细胞介导，伴有抗体反应，破坏胰岛β细胞并影响了胰岛素的分泌功能。

Human iPSC来源的β细胞转导其表达CD64t，表达HLA-A2的β细胞被anti-HLA-A2 IgG1 抗体介导ADCC和CDC的杀伤，然而β cellCD64t 有效避免了抗体介导的杀伤。

3、CAR TCD64t细胞

临床CAR-T细胞疗法诱导抗体反应，这在实体瘤患者中更为明显。CAR TCD64t细胞是在转导CAR的同时转导CD64t，CAR TCD64t对肿瘤细胞的杀伤不受Fc结合的影响。然而在ADCC和CDC实验中，CAR TCD64t细胞可以逃避5种抗体介导的细胞杀伤（antibodies against an HLA epitope (HLA-A2), non-HLA epitopes (CD52 and CD3), a blood type antigen (Rh(D)) and the CAR receptor (anti-CD19 scFv)。

epiCsTPO, CD64t 细胞可以有效保护小鼠免受自身免疫抗体介导的杀伤

CAR TCD64t细胞可以逃避5种抗体介导的杀伤

本研究中所有的Figure都应用了安捷伦xCELLigence RTCA实时细胞分析仪进行了ADCC,CDC以及肿瘤靶细胞的杀伤实验，通过简单的步骤与操作就可以进行实时的细胞分析，并得到连续的结果。

应用 RTCA 实验步骤

1、预包被

实时细胞杀伤实验在xCELLigence RTCA SP和MP平台上进行，首先将E-plate 96孔板用胶原蛋白/Gelatin预包被；

2、接种

加入4 × 104 待检测细胞，此时孔中的培养基为100μl，并将细胞放入仪器中培养与检测；

3、ADCC/CDC

当细胞cell index值达到0.7，ADCC实验：将4 × 104 NK细胞与待测 抗体混匀（50μl）后加入到E-plate中；

CDC实验：将待测血清样本（存在补体）与抗体混匀（50μl）后加入到E-plate中；以2% Triton X-100处理的细胞作为阳性对照。将E-plate放入RTCA仪器中进行实时监测细胞的杀伤；

4、使用RTCA Software pro分析数据

Agilent xCELLigence RTCA技术是基于微金电极阵列的实时无标记生物传感技术，无需对细胞做任何标记，可对细胞进行全程自动检测，大幅缩减人员的操作步骤，且确保实验数据的客观准确和完整性。采用实时无标记的 xCELLigence RTCA系统，可以在无需对靶细胞或者效应细胞进行标记的前提下，实时长时程检测靶细胞的增殖以及效应细胞对其的杀伤作用，进而来评估效应细胞杀伤能力的连续性和持久性。xCELLigence RTCA eSight将显微成像与实时无标记检测进行整合，实现了活细胞成像与高灵敏度生物传感技术的完 美结合，阻抗生物传感器与明视场和 3 个荧光通道相结合，可以满足客户同时对同一细胞群进行实时阻抗和成像检测，能够连续追踪细胞生长过程，可获得细胞行为前所未有的细节，为科研人员提供更多丰富的信息。