仪器网(yiqi.com)欢迎您!

| 注册登录
网站首页-资讯-专题- 微头条-话题-产品- 品牌库-搜索-供应商- 展会-招标-采购- 社区-知识-技术-资料库-方案-产品库- 视频

问答社区

【Application Note】受阻、非标准氨基酸的微波辅助多肽固相合成

培安(中国)有限公司 2022-11-29 12:00:18 190  浏览
  • 摘要

    波增强的多肽固相合成(SPPS)能够快速有效地进行大体积氨基酸(如Aib和N-Me-A)的常规困难偶联

    • 酰基载体蛋白衍生物VQAibAibIDYINGOH和VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的合成在2小时内完成,纯度分别为95%和86%

    • GEQKLGAibAibAibASEESLG-NH2的合成在3小时内完成,纯度为 89%


    介绍

    在许多生物学相关的化合物中都可以找到受阻的非标准氨基酸,例如α-氨基异丁酸(Aib)和N-甲基丙氨酸((N-Me)-A)(图1)1-3。然而,包括Aib或N-甲基化氨基酸的肽合成已被证明具有挑战性;第二个甲基引入的空间位阻,无论是在α-碳还是酰胺氮上,都使这些氨基酸衍生物在传统SPPS中难以偶联



    图1 位阻、非标准氨基酸


    然而,通过使用微波增强的SPPS,与受阻非标准氨基酸相关的困难已被最小化。在SPPS中使用微波能量可以快速有效地完成大体积氨基酸(如Aib和N-甲基丙氨酸)的常规困难偶联4,5


    材料和方法

    试剂

    N-α-Fmoc-α-氨基异丁酸获自AnaSpec(Freemont,CA)。Fmoc-N-Me-Ala-OH获自Peptides International(Louisville,KY)。所有其他氨基酸均获自CEM Corporation(Matthews,NC),并含有以下侧链保护基团:Asn(Trt)、Asp(OMpe)、Gln(Trt)、Glu(OtBu)、Lys(Boc)、Ser(OtBu) 和Tyr(tBu) 。Oxyma Pure和Rink Amide ProTideTM LL树脂购自CEM Corporation(Matthews,NC)。N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)获自CreoSalus(Louisville,KY)。Fmoc-Gly-Wang Resin LL购自NovaBiochem(St.Louis,MO)。哌啶获自Alfa Aesar(Ward Hill,MA)。三氟乙酸(TFA)、3,6-dioxa-1,8-octanedithiol(DODT)、三异丙基硅烷(TIS)和乙酸购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。二氯甲烷(DCM)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和无水乙 醚(Et2O)购自VWR (West Chester,PA)。HPLC级水(H2O)和HPLC级 乙 腈(MeCN) 购 自 Fisher Scientific (Waltham, MA) 。


    多肽合成:GEQKLGAibAibAibASEESLG-NH2

    使用CEM Liberty Blue™自动微波肽合成仪在Rink Amide ProTide LL树脂(离子交换容量:0.18meq/g)上以0.1mmol规模制备多肽。用哌啶和Oxyma Pure在DMF中进行脱保护。使用DMF中的DIC、DMF中的Oxyma Pure和5倍过量的Fmoc-AA-OH进行偶联反应。使用具有TFA/H2O/TIS/DODT的CEM Razor高通量肽切割系统进行切割。裂解后,肽在无水乙 醚中沉淀并冻干过夜。


    多肽合成:VQAibAibIDYING-OH

    使用CEM Liberty Blue自动微波肽合成仪在FmocGly-Wang LL 树脂(离子交换容量:0.33meq/g)上以0.1mmol规模制备。用哌啶和Oxyma Pure在DMF中进行脱保护。使用DMF中的DIC、DMF中的Oxyma Pure和5倍过量的Fmoc-AA-OH进行偶联反应。使用具有 TFA/H2O/TIS/DODT的CEM Razor高通量肽切割系统进行切割。裂解后,肽在无水乙 醚中沉淀并冻干过夜。


    多肽合成:VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH

    使用CEM Liberty Blue自动微波肽合成仪在FmocGly-Wang LL 树脂(离子交换容量:0.19meq/g)上以0.1mmol规模制备肽。用哌啶和Oxyma Pure在DMF中进行脱保护。使用DMF中的DIC、DMF中的Oxyma Pure和5倍过量的Fmoc-AA-OH进行偶联反应。使用具有 TFA/H2O/TIS/DODT的CEM Razor高通量肽切割系统进行切割。裂解后,肽在无水乙 醚中沉淀并冻干过夜。


    多肽分析

    在配备有PDA检测器的Waters Acquity UPLC系统上分析肽,该检测器配备Acquity UPLC BEH C8柱(1.7mm和2.1x100mm)。UPLC系统连接到Waters 3100 Single Quad MS用于结构测定。在Waters MassLynx软件上进行峰分析。使用(i)H2O和(ii)MeCN中的0.1%TFA梯度洗脱进行分离。


    结果

    在Liberty Blue自动微波肽合成仪上GEQKLGAibAibAibAibASEEDLG-NH2微波增强SPPS产生了89%纯度的目标肽(图2)。



    图2.GEQKLGAibAibAibASEEDLG-NH2的HPLC色谱图

    在Liberty Blue自动微波肽合成仪上的VQAibAibIDYING-OH的微波增强SPPS产生了纯度为95% 的目标肽(图3)。



    图 3:VQAibAibIDYING-OH的HPLC色谱图

    在Liberty Blue自动微波肽合成仪上的VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的微波增强SPPS产生了纯度为86%的目标肽(图4)。


    图 4:VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的HPLC色谱图


    结论

    微波增强的SPPS能够快速有效的进行大体积氨基酸(如Aib和N-Me-A)的常规困难偶联。常规合成GEQKLGAibAibAibASEEDLG-NH2需要40小时且纯度< 10%,但微波增强SPPS在3小时内产生目标肽且纯度为89%。此外,酰基载体蛋白衍生物VQAibAibIDYING-OH和VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的合成在2小时内完成,纯度分别为95% 和86%。微波增强的SPPS已被证明是一种有效的工具,可以最 大限度地减少SPPS中受阻的非标准氨基酸相关的困难。


    参考文献

    1. Mueller, P.; Rudin, D. O. Nature1968217, 713–719.

    2. Rebuffat, S.; Goulard, C.; Hlimi, S.; Bodo, B. J. Pept. Sci20006, 519–533.

    3. Ahmed, G.; Elger, W.; Meece, F.; Nair, H. B.; Schneider, B.; Wyrwa, R.; Nickisch, K. Bioorg. Med. Chem201725, 5569–5575. 

    4. Collins, J. M. Microwave-Enhanced Synthesis of Peptides, Proteins, and Peptidomimetics. In Microwaves in Organic Synthesis, Third Edition; de la Hoz, A.; Loupy, A.; Wiley-VCH: Weinheim, 2012; 897–959.

    5. Ben Haj Salah, K.; Inguimbert, N. Org. Lett. 201416 (6), 1783–1785.


参与评论

全部评论(0条)

获取验证码
我已经阅读并接受《仪器网服务协议》

热门问答

【Application Note】受阻、非标准氨基酸的微波辅助多肽固相合成

摘要

波增强的多肽固相合成(SPPS)能够快速有效地进行大体积氨基酸(如Aib和N-Me-A)的常规困难偶联

• 酰基载体蛋白衍生物VQAibAibIDYINGOH和VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的合成在2小时内完成,纯度分别为95%和86%

• GEQKLGAibAibAibASEESLG-NH2的合成在3小时内完成,纯度为 89%


介绍

在许多生物学相关的化合物中都可以找到受阻的非标准氨基酸,例如α-氨基异丁酸(Aib)和N-甲基丙氨酸((N-Me)-A)(图1)1-3。然而,包括Aib或N-甲基化氨基酸的肽合成已被证明具有挑战性;第二个甲基引入的空间位阻,无论是在α-碳还是酰胺氮上,都使这些氨基酸衍生物在传统SPPS中难以偶联



图1 位阻、非标准氨基酸


然而,通过使用微波增强的SPPS,与受阻非标准氨基酸相关的困难已被最小化。在SPPS中使用微波能量可以快速有效地完成大体积氨基酸(如Aib和N-甲基丙氨酸)的常规困难偶联4,5


材料和方法

试剂

N-α-Fmoc-α-氨基异丁酸获自AnaSpec(Freemont,CA)。Fmoc-N-Me-Ala-OH获自Peptides International(Louisville,KY)。所有其他氨基酸均获自CEM Corporation(Matthews,NC),并含有以下侧链保护基团:Asn(Trt)、Asp(OMpe)、Gln(Trt)、Glu(OtBu)、Lys(Boc)、Ser(OtBu) 和Tyr(tBu) 。Oxyma Pure和Rink Amide ProTideTM LL树脂购自CEM Corporation(Matthews,NC)。N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)获自CreoSalus(Louisville,KY)。Fmoc-Gly-Wang Resin LL购自NovaBiochem(St.Louis,MO)。哌啶获自Alfa Aesar(Ward Hill,MA)。三氟乙酸(TFA)、3,6-dioxa-1,8-octanedithiol(DODT)、三异丙基硅烷(TIS)和乙酸购自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。二氯甲烷(DCM)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和无水乙 醚(Et2O)购自VWR (West Chester,PA)。HPLC级水(H2O)和HPLC级 乙 腈(MeCN) 购 自 Fisher Scientific (Waltham, MA) 。


多肽合成:GEQKLGAibAibAibASEESLG-NH2

使用CEM Liberty Blue™自动微波肽合成仪在Rink Amide ProTide LL树脂(离子交换容量:0.18meq/g)上以0.1mmol规模制备多肽。用哌啶和Oxyma Pure在DMF中进行脱保护。使用DMF中的DIC、DMF中的Oxyma Pure和5倍过量的Fmoc-AA-OH进行偶联反应。使用具有TFA/H2O/TIS/DODT的CEM Razor高通量肽切割系统进行切割。裂解后,肽在无水乙 醚中沉淀并冻干过夜。


多肽合成:VQAibAibIDYING-OH

使用CEM Liberty Blue自动微波肽合成仪在FmocGly-Wang LL 树脂(离子交换容量:0.33meq/g)上以0.1mmol规模制备。用哌啶和Oxyma Pure在DMF中进行脱保护。使用DMF中的DIC、DMF中的Oxyma Pure和5倍过量的Fmoc-AA-OH进行偶联反应。使用具有 TFA/H2O/TIS/DODT的CEM Razor高通量肽切割系统进行切割。裂解后,肽在无水乙 醚中沉淀并冻干过夜。


多肽合成:VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH

使用CEM Liberty Blue自动微波肽合成仪在FmocGly-Wang LL 树脂(离子交换容量:0.19meq/g)上以0.1mmol规模制备肽。用哌啶和Oxyma Pure在DMF中进行脱保护。使用DMF中的DIC、DMF中的Oxyma Pure和5倍过量的Fmoc-AA-OH进行偶联反应。使用具有 TFA/H2O/TIS/DODT的CEM Razor高通量肽切割系统进行切割。裂解后,肽在无水乙 醚中沉淀并冻干过夜。


多肽分析

在配备有PDA检测器的Waters Acquity UPLC系统上分析肽,该检测器配备Acquity UPLC BEH C8柱(1.7mm和2.1x100mm)。UPLC系统连接到Waters 3100 Single Quad MS用于结构测定。在Waters MassLynx软件上进行峰分析。使用(i)H2O和(ii)MeCN中的0.1%TFA梯度洗脱进行分离。


结果

在Liberty Blue自动微波肽合成仪上GEQKLGAibAibAibAibASEEDLG-NH2微波增强SPPS产生了89%纯度的目标肽(图2)。



图2.GEQKLGAibAibAibASEEDLG-NH2的HPLC色谱图

在Liberty Blue自动微波肽合成仪上的VQAibAibIDYING-OH的微波增强SPPS产生了纯度为95% 的目标肽(图3)。



图 3:VQAibAibIDYING-OH的HPLC色谱图

在Liberty Blue自动微波肽合成仪上的VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的微波增强SPPS产生了纯度为86%的目标肽(图4)。


图 4:VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的HPLC色谱图


结论

微波增强的SPPS能够快速有效的进行大体积氨基酸(如Aib和N-Me-A)的常规困难偶联。常规合成GEQKLGAibAibAibASEEDLG-NH2需要40小时且纯度< 10%,但微波增强SPPS在3小时内产生目标肽且纯度为89%。此外,酰基载体蛋白衍生物VQAibAibIDYING-OH和VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的合成在2小时内完成,纯度分别为95% 和86%。微波增强的SPPS已被证明是一种有效的工具,可以最 大限度地减少SPPS中受阻的非标准氨基酸相关的困难。


参考文献

  1. Mueller, P.; Rudin, D. O. Nature1968217, 713–719.

  2. Rebuffat, S.; Goulard, C.; Hlimi, S.; Bodo, B. J. Pept. Sci20006, 519–533.

  3. Ahmed, G.; Elger, W.; Meece, F.; Nair, H. B.; Schneider, B.; Wyrwa, R.; Nickisch, K. Bioorg. Med. Chem201725, 5569–5575. 

  4. Collins, J. M. Microwave-Enhanced Synthesis of Peptides, Proteins, and Peptidomimetics. In Microwaves in Organic Synthesis, Third Edition; de la Hoz, A.; Loupy, A.; Wiley-VCH: Weinheim, 2012; 897–959.

  5. Ben Haj Salah, K.; Inguimbert, N. Org. Lett. 201416 (6), 1783–1785.


2022-11-29 12:00:18 190 0
多肽固相合成法的保护
 
2018-11-19 05:27:16 339 0
多肽固相合成法的介绍
 
2018-12-01 17:58:13 372 0
多肽固相合成法的发明
 
2018-11-18 07:16:06 355 0
多肽固相合成法的活化基团
 
2018-11-15 01:55:08 306 0
多肽固相合成法的固定
 
2018-11-21 04:00:20 336 0
多肽固相合成法的途径
 
2018-11-24 06:58:31 240 0
多肽固相合成法的不稳定
 
2018-11-26 18:57:33 267 0
【Application Note】加工肉类的水分、脂肪和蛋白质分析

摘要

40多年来,CEM一直是食品分析的先驱,与大大小小的公司合作,开发更好的工艺以提高产品质量。在这个应用说明中,我们展示了直接分析加工肉类产品的好处,这些产品通常含有混合成分,并不总是符合传统测试方法。拥有正确的水分、脂肪和蛋白质分析水平可以转化为安全、有利和持久的高质量产品。


简介

加工肉制品,如香肠、腊肠和肉干,由于产品的非均质性,通常含有草药、香料、防腐剂和其他非肉类成分,导致难以分析。传统的湿化学分析,如化学脂肪提取或凯氏消解法分析蛋白质,都很昂贵。消解法进行蛋白质分析,既昂贵又耗时,而且需要使用危险化学品。湿化学方法经常被非肉类添加剂所影响,导致不准确的结果和随后的配方错误。近红外光谱法(NIR)是一种快速替代湿化学方法的检测方法。近红外光谱法是湿化学方法的快速替代方法,在不到一分钟的时间内提供结果,而且不会使用危险化学品。然而,近红外和傅立叶红外等光学方法需要非常高的样品均匀度,并且必须根据配方中使用的添加剂的数量进行校准。颜色、浓度或配方的变化会对结果产生负面影响,从而使获得准确的结果变得很困难。



SMART 6™和ORACLE™系统的结合提供了快速的水分和脂肪测定,其结果在5分钟内完成。SMART 6水分和固体分析仪利用双频能量,在3分钟或更短时间内快速分析任何产品,无论是湿的还是干的,都能在3分钟或更短时间内完成。ORACLE通过完全隔离脂肪分子的信号,消除了对方法开发的需要。即使在复杂的样品基质中,也能完全隔离脂肪分子的信号。



Sprint®是一个直接的蛋白质测量系统,它利用染料结合技术确保只检测真正的蛋白质。而不是总氮,因为总氮在非蛋白氮存在的情况下会导致错误的测量。Sprint不需要定期校准,而且任何实验室用户都可以很容易的创建方法。与之相竞争的快速技术(近红外、FT-IR、TDNMR)由于颜色、质地和浓度的变化,每个独特的样品都需要持续的、昂贵的校准和方法开发。这项研究表明,CEM的创新技术可以快速分析各种加工肉类的水分、脂肪和蛋白质,其准确性和精确度与参考方法相当。


实验

为了评估SMART 6、ORACLE和Sprint的性能,我们获得了五种加工肉类产品:热狗、奶酪香肠、香肠、半干香肠、牛肉棒和火鸡棒。为了测定水分,每个产品中取2克在SMART 6中进行了分析。参考测试在烘箱中进行,一式三份,以建立一个比较的基础。烘箱法被设定为在100°C下8小时,然后在干燥状态下冷却一段时间,以确保完全干燥。为了进行脂肪分析,将干燥后的样品从SMART 6中取出,放在ORACLE中,扫描30秒。测试前无需校准或方法开发。脂肪参考测试是使用索氏提取法进行的。对于蛋白质分析,将1克样品称量到Sprint样品杯中,然后放入Sprint装置中。染料结合反应是完全自动化的,大约需要4分钟完成。蛋白质的结果与凯氏消解法进行了比较。


结果

使用CEM的快速技术,水分、脂肪和蛋白质的平均结果与参考结果相比非常接近,如表1、2和3所示。


表1.SMART 6和烘箱之间的水分含量比较


表2.ORACLE和参考化学之间的脂肪含量比较


表3.Sprint和凯氏消解法之间的蛋白质含量比较


结论

对于加工肉类产品,正确的水分、脂肪和蛋白质水平对产品质量和生产可行性至关重要。对于那些要求高质量和高性能的加工肉制品,CEM提供了快速的测试方案,其结果与参考方法一致。与CEM的专 利技术相结合,转化为市场上最快、最准确的食品成分测试。SMART 6、ORACLE和Sprint分析仪节省了时间,结果准确,以最 低成本的方案帮助您节省资金。

2023-01-10 13:45:51 149 0
多肽固相合成法的侧链保护
 
2018-12-08 05:49:17 381 0
超声波辅助萃取与微波辅助萃取的工作原理及差异
简单点
2018-12-02 02:14:11 327 0
微波辅助消解法有哪些优点?
 
2012-03-19 00:54:23 371 1
固相合成多肽中哌啶多次脱保护会有什么结果
 
2018-11-11 14:19:01 263 0
氨基酸合成多肽的模版是什么?
 
2012-10-03 14:12:22 514 2
如何利用微波辅助从果皮中提取果胶?
Z好说清楚实验和工艺流程,谢谢咯,各位大虾……... Z好说清楚实验和工艺流程,谢谢咯,各位大虾…… 展开
2007-10-20 15:59:10 333 1
多肽至少有几个氨基酸分子
 
2018-11-19 23:31:47 195 0
氨基酸多肽有什么功效
 
2017-11-26 19:19:26 610 1
多肽是不是氨基酸?有什么区别?
氨基酸是一个羧基一个氨基接在同一碳原子上,可是多肽中的氨基、羧基别没有接在同一个碳原子上,那多肽是氨基酸吗?
2010-10-03 11:52:14 943 3
求助~!!!!微波辅助提取苍术的原理 设备 特点 和应用
还有提取苍术挥发油的工艺改进。。。。。... 还有提取苍术挥发油的工艺改进。。。。。 展开
2010-11-02 18:59:10 338 1

4月突出贡献榜

推荐主页

最新话题

请您留言

感谢您的关注,当前客服人员不在线,请填写一下您的信息,我们会尽快和您联系。

提交