机器人走进实验室系列（三）固相萃取篇：Extraction+互联设备实现全自动固相萃取工作流

样品制备 — 从基质中分离出目标分析物，并尽可能去除干扰，是生物分析工作流程的关键组成部分。为了获得准确、精密、可重现的实验结果，往往需要熟练且有经验的分析人员，因为任何错误或不一致都可能导致定量不准确或重做。这些错误或不一致包括在生成校准曲线和QC样品时的移液错误、遗漏或错误标记的样品、不正确的试剂添加等情况。

将自动化引入生物分析实验室不仅有助于最小化或消除这些挑战，还可以解放分析人员的双手，使其能够从事其他更高价值的工作。

下面小编就向大家介绍如何使用Andrew+移液机器人制备校准曲线，对QC样品（血浆中的多种小分子药物）进行稀释。目标分析物包括乙酰唑胺、扑热息痛、泼尼松、2-甲基苯甲酰胺、可的松、美托洛尔和阿米替林。然后，使用Andrew+搭配Extraction+模块，对样品进行全自动SPE。制备好的样品使用LC-MS进行定量分析，获得校准曲线结果以及重现性和回收率指标。

图1. Andrew+搭配Extraction+ SPE新模块，执行自动化SPE样品制备和LC-MS分析工作流，分别使用Oasis HLB SPE小柱和SPE萃取板。

 优势

使用Andrew+ Robot搭配Extraction+固相萃取新模块，可实现标准曲线制备、QC样品稀释和无人值守的全自动SPE工作流；

OneLab软件拥有简洁直观的用户界面，便于用户轻松设计和执行各种自动化样品制备方案，轻松实现方法创建和方法转移；

1cc、3cc和6cc固相萃取小柱或96孔萃取板均可在Extraction+互联设备上实现固相萃取；

受OneLab软件控制的可编程的真空泵压力曲线可提高SPE方法的重现性。

实验方案一

制备校准曲线，样品稀释，使用Oasis HLB 1cc SPE小柱执行固相萃取 

样品进行反相固相萃取工作流：

*注意：沃特世于1996年推出Oasis HLB, 是所有Oasis吸附剂的主要成分。可耐受pH 0-14，采用独特的水可浸润性聚合物吸附剂，省去了活化和平衡步骤，是SPE的新标杆。

以Andrew+移液机器人进行全自动SPE为例，介绍OneLab软件中的自动化方法，Andrew+将上图所示的SPE步骤自动化。

图2. 左侧为OneLab的方法创建界面，右侧为SPE工作流使用的移液枪、枪头、Dominos和Device物料清单。

Andrew+移液机器人搭载Extraction+ SPE新模块的仪器配置如下图，包括：

Andrew+ Robot主机；

微孔板抓手（自动移动96孔板）；

Extraction+配套的真空泵（压力曲线受软件控制）；

废液瓶（上样和清洗产生的废液，经真空泵抽取，进入废液瓶）；

Extraction+配套的萃取套件（上部放置SPE小柱或萃取板，下部放置收集容器）；

放置SPE小柱或萃取板的位置（左侧升降Lifter可将承载SPE小柱的架子移到左侧，以便用微孔板抓手将收集容器放入下部）。

实验结果

使用 沃特世ACQUITY UPLC I-Class液相系统搭载快速柱进行色谱分离，再用 Xevo TQ-XS串联四极杆质谱仪对从血浆中萃取出的小分子药物进行检测。分析3个浓度的血浆样品(Low QC-10 ng/mL, Mid QC-50 ng/mL, High QC-150 ng/mL)，回收率范围是95.8% - 108.4%，精密度结果是几乎所有RSD%值≤5%。这些结果满足FDA对小分子生物分析方法验证的推荐限值。

表1. 回收率和重现性结果 — Andrew+执行血浆样品制备，Extraction+搭载Oasis HLB 1cc SPE小柱执行全自动SPE。

实验方案二

制备校准曲线，样品稀释，使用Oasis HLB 30mg 萃取板执行固相萃取 

与实验方案一执行同样的反相固相萃取工作流，萃取耗材是Oasis HLB 30 mg plates。

 实验结果

使用沃特世ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色谱系统搭载快速柱进行色谱分离，再用Xevo TQ-XS串联四极杆质谱仪对从血浆中萃取出的小分子药物进行检测。分析3个浓度的血浆样品(Low QC-20 ng/mL, Mid QC-50 ng/mL, High QC-400 ng/mL)，回收率范围是88.6% - 110.8%，精密度结果是大多数RSD%值≤5%。这些结果满足FDA对小分子生物分析方法验证的推荐限值。

表2. 准确度和精密度结果 — Andrew+执行血浆样品制备，Extraction+搭载Oasis HLB 30 mg plates执行全自动SPE。