缓冲液在蛋白中的组成
-
酶联免疫或化学发光免疫分析的对象包括有酶、蛋白、抗体、多肽、抗原、核酸、糖、脂质等物质,其中酶、蛋白、抗体或多肽均属于蛋白类分子,需要使用蛋白缓冲液来保护蛋白。
1. 生物缓冲液,包括有Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、PB磷酸缓冲液、CB碳酸缓冲液等,其中Tris的缓冲体系应用较为普遍,缓冲能力比较强,同时对蛋白有良好的溶解性,为蛋白提供合适的pH环境。
2. 盐类,主要是氯化钠,调节蛋白缓冲液的离子强度(类似盐浓度)。通常配制时,需较少的离子强度防止蛋白沉淀;但需要将蛋白脱离出来时,应增加离子强度,否则蛋白难以沉淀脱离完全。对于有些蛋白,两性离子的盐类有助于蛋白结合。
3. 表面活性剂:吐温20、Triton X-100等,改变缓冲溶液表面张力,增加试剂相容性。
4. 有时还需要添加糖类如蔗糖、海藻糖等,惰性蛋白如Casein(酪蛋白),防腐剂如叠氮钠、卡松(异噻唑啉酮混合物)等。
蛋白缓冲液选择优化
虽然蛋白缓冲液的基本组成类似,不过没有通用的缓冲液,不同的系统必须分别优化。不同的蛋白其合适的pH值、亲水性、溶解性、稳定性都有差异。另外,蛋白在缓冲液中越不稳定,蛋白结合力越强。当缓冲液pH与蛋白等电点相同时,蛋白最不稳定,容易聚集沉淀。
蛋白缓冲液的稳定作用
蛋白缓冲液中添加有糖,对包被蛋白的稳定性有重要作用,减缓蛋白老化作用,并增加亲水性;添加的表面活性剂也是增加蛋白的亲水性,惰性蛋白也具有保护作用。在蛋白结合包被步骤中,需用沉淀剂(醇)降低蛋白的稳定性,也可润湿膜,减少膜带有的静电。
这里的蛋白在缓冲液中的稳定与不稳定是特定的,改变缓冲液的部分条件以优化不同的蛋白处理步骤,前提都是不能使蛋白变性或失活。德晟是生物缓冲剂厂家,生产有Tris、Bicine、MOPS等多种缓冲剂。
全部评论(0条)
热门问答
- 缓冲液在蛋白中的组成
酶联免疫或化学发光免疫分析的对象包括有酶、蛋白、抗体、多肽、抗原、核酸、糖、脂质等物质,其中酶、蛋白、抗体或多肽均属于蛋白类分子,需要使用蛋白缓冲液来保护蛋白。
1. 生物缓冲液,包括有Tris-HCl缓冲液、Tricine缓冲液、PB磷酸缓冲液、CB碳酸缓冲液等,其中Tris的缓冲体系应用较为普遍,缓冲能力比较强,同时对蛋白有良好的溶解性,为蛋白提供合适的pH环境。
2. 盐类,主要是氯化钠,调节蛋白缓冲液的离子强度(类似盐浓度)。通常配制时,需较少的离子强度防止蛋白沉淀;但需要将蛋白脱离出来时,应增加离子强度,否则蛋白难以沉淀脱离完全。对于有些蛋白,两性离子的盐类有助于蛋白结合。
3. 表面活性剂:吐温20、Triton X-100等,改变缓冲溶液表面张力,增加试剂相容性。
4. 有时还需要添加糖类如蔗糖、海藻糖等,惰性蛋白如Casein(酪蛋白),防腐剂如叠氮钠、卡松(异噻唑啉酮混合物)等。
蛋白缓冲液选择优化
虽然蛋白缓冲液的基本组成类似,不过没有通用的缓冲液,不同的系统必须分别优化。不同的蛋白其合适的pH值、亲水性、溶解性、稳定性都有差异。另外,蛋白在缓冲液中越不稳定,蛋白结合力越强。当缓冲液pH与蛋白等电点相同时,蛋白最不稳定,容易聚集沉淀。
蛋白缓冲液的稳定作用
蛋白缓冲液中添加有糖,对包被蛋白的稳定性有重要作用,减缓蛋白老化作用,并增加亲水性;添加的表面活性剂也是增加蛋白的亲水性,惰性蛋白也具有保护作用。在蛋白结合包被步骤中,需用沉淀剂(醇)降低蛋白的稳定性,也可润湿膜,减少膜带有的静电。
这里的蛋白在缓冲液中的稳定与不稳定是特定的,改变缓冲液的部分条件以优化不同的蛋白处理步骤,前提都是不能使蛋白变性或失活。德晟是生物缓冲剂厂家,生产有Tris、Bicine、MOPS等多种缓冲剂。
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳的蛋白可以先变性再与蛋白缓冲液混合吗?
- PCR技术中的缓冲液
- 可调节PH值.... 可调节PH值. 展开
- 在生物化学研究中,为什么要使用缓冲液
- 蛋白a在纯化中会到什么问题
- 阴离子层析纯化蛋白可以用含有edta的缓冲液吗
- DNA提取缓冲液中磷酸钠的作用
- 在实验室提供的一个DNA提取缓冲液改进配方中添加了Na3PO4*12H2O溶液,我想清楚下它的作用是什么,谢谢各位大侠~~
- 用阳离子交换柱子分离蛋白,怎么调缓冲液ph
- 在细菌基因组中怎么找到分泌蛋白
- 蛋白表达在培养基上清中如何纯化
- pbs磷酸盐缓冲液ph值对纯化蛋白影响大吗
- 蛋白表达 蛋白在破碎后沉淀 怎么办
- 在免疫印迹实验检测蛋白的实验中应该注意什么问题
- 小木虫 为什么tcep在磷酸盐缓冲液不稳定
- 如何使用纯化标签获得在大肠杆菌中的表达的蛋白
- 如何使用纯化标签获得在大肠杆菌中的表达的蛋白
- 生物缓冲液生物实验中需要配制哪些缓冲液
- 在组成细胞膜的脂质中,磷脂Z丰富吗?
- 在高中生物中,光合作用实验里,为什么要用CO2缓冲液吸收CO2控制变量
参与评论
登录后参与评论