GB2763-2019农药残留检测八大热点问题深度解答

GB2763-2019《食品安全国家标准-食品中农药ZD残留限量》于2019年08月15日发布，并于今年02月15日执行，针对2763中农残检测的热点问题，安谱实验开展的系列线上食品中农残检测技术专场培训取得了良好的反映，今天小编根据各位老师关注的热点问题，整理了农残检测八大热点问题解答，以飨读者。

Q：上机前加入内标的目的是什么，蔬菜水果的检测，为什么在上机前加入内标，内标的加入时间怎么去确定？

A：内标法是一种间接或者相对的校正方法，在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确性和可靠性。使用内标法要求内标物质具备以下性质：

1.试样中不存在的物质

2.与待测组分性质接近（化学结构、挥发性、极性、溶解度、色谱行为和响应特征一致）

3.纯度高，稳定（以便于能够准确的添加到样品中）

4.与样品互溶

5.不与其他组分发生相互干扰（能够准确分离和定量）

对于内标的加入时间，同位素内标，建议在样品处理前就加入，这样可以监测和消除整个处理过程中操作条件波动引起的结果误差，而且认为前处理操作，同位素内标和待分析物在处理过程中受到的影响是一致，它监控了整个分析过程，而对于非同位素内标，一般在上机前加入，只考虑仪器波动对分析结果的影响，它只监控了仪器状态对于结果的准确性的影响。

Q：如果GB2763没有推荐相应的检测方法，怎么去做该基质中相应农药的残留检测，另外，如果2763推荐的方法，不包括检测基质，如茶叶中溴 氰菊酯的检测方法在2763里指定的是GB/T5009.110 ，但是GB/T5009.110的检测基质为：茶叶、谷物、蔬菜？

A：如果GB2763中对于某一个限量值，没有提供相对应的检测方法，如苯菌酮，那么这个限量值一定是一个临时限量，对于临时限量的检测方法，可以适用现行有效的标准或者规定方法，推广到临时限量的检测项中，并对扩充的方法进行验证，GB2763在规范性文件引用文件说明中指出：“ 在本标准发布后，新发布实施的食品安全国家标准（GB23200）同样适用于相应参数的检测。”这表明了对于没有推荐检测方法的限量值检测项，国家强制性标准GB23200等系列标准，同样可以适用于GB2763的限量值的检测。GB2763-2019中溴腈菊酯在茶叶基质中的推荐检测方法为GB/T5009.110和GB23200.113，而GB/T5009.110中的检测方法规定检测基质为：谷物和蔬菜，没有茶叶。对于GB2763的推荐方法，有两种方式去解读，一种是“按照标准”，按照标准就是该标准的适用范围是完全涵盖GB2763给出的方法的基质；另外一个是“参照标准”，参照标准就是标准的适用范围不涵盖GB2763给出的基质，对于参照标准，需要对扩充了的基质进行可靠性验证，以确定该标准在超出范围外的基质，检测的结果适用和可靠。

Q：什么是阳性样品，阳性样品怎么定量？

A：阳性样品是依据检测目标物来定的，如果样品中不含有关注检测的目标物质，就称为阴性样品，如果含有检测的目标物，且其含量超过了限量标准，就称为阳性样品，阳性样品涉及两个概念，一个概念是“检出”，另外一个是“超标”。对于超标的样品一定是阳性样品，对于所有不得检出的样品，单从检出概念来说，检出就属于阳性样品。关于定量，2386号公告，给出了两种定量方式，一种是标准曲线法，另外一种是单点法，前者考证了整个结果的线性范围，但是，对于样品定值检测，特别是阳性样品，推荐单点法定量，因为农残检测的所使用的仪器为色谱和质谱，按照标准曲线法，测定一条标曲，需要5个点，每个点需要扎针进样多次，而色谱和质谱的仪器的稳定时间都不是很长的，当标曲走完，仪器状态可能已经发生了变化，这个时候使用标曲定量，是容易带来很大误差的，使用单点法就能有效避免，另外需要注意阳性样品的报告值应该和单点定量的浓度在同一水平值附近，浓度水平差异在30%以内。

Q：怎样做好一条合格的标准曲线？

A：根据NY/T 788-2018《农作物中农药残留试验准则》第10.2.2.4规定：“以农药的进样浓度（mg/L）为横坐标，响应值（峰高或峰面积）为纵坐标制作标准曲线，标准曲线的浓度范围尽可能覆盖2个数量级，至少5个点（不包括原点）”。农业部2386号公告中对标曲的制定规定：“包括定量限、ZD残留限量或10倍定量限。对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不低于0.98，对于确证方法，相关系数不低于0.99。测试溶液中被测组分浓度应在校准曲线的线性范围内。”GB/T 27417对于线性范围的规定：“校正用的标准点应尽可能均匀分布在关注的浓度范围并能覆盖该范围。”对于实际样品检测，需要考察关注目标物在仪器上的响应，另外一般将限量值设置为线性中间值，以便于判定样品检测值是否超过限量值水平，并充分评估基质效应可能带来定值的影响。

Q：什么是检测结果的不确定度，不确定度的来源有哪些，不确定度和误差是同一回事吗？

A：根据IUPAC的定义：不确定度（Uncertainty）为表征合理地赋予被测量值的分散性，它是与测定结果相联系的参数，不确定度的含义是指由于测量误差的存在，对被测定值的不能肯定的程度，表明了该结果的可信赖程度，实际上测定值是以一定概率分散在某个区域内。不确定度越小，表明结果与真值越接近。它包含两个方面的内容，一个是区间的宽度，一个是该区间对应的置信概率。不确定度的来源有如下：

1.对样品的定义不完整

2.分析方法不理想

3.取样的代表性不够

4.对分析过程过程中的环境影响认识或者控制不完善

5.仪器读数的偏差

6.仪器性能的局限

7.标准物质的标准值的不准确

8.相同分析条件下，分析时的重复观测值的变化。

不确定度与误差是两个截然不同的概念，不确定度能全面反映结果的分散性，不确定度总是不为0的正值，而误差可能是正值，也可能是负值，甚至接近于0，不确定度原则上可以具体评定，而误差是测定结果减去真值，一般由于真值未知，而不能计算，使用不确定度代替误差，使得测试结果的质量评估更加科学。

Q：什么是基质效应，怎么消除或者避免基质效应，做基质匹配曲线时，选择基质的原则是什么？

A：基质效应是农药残留检测中常见的问题，基质效应指的是被分析物以外的组分对待测物的影响，可以通过空白基质中添加相同浓度目标物质的响应与标准溶液中待测物质的响应的比值来进行评价，通常比值大于1，为基质增强，比值小于1为基质减弱。可以通过如下方式来减弱基质效应带来的影响：

1.配制基质标准曲线

2.保护剂法（使用合适的试剂阻止活性位点与目标分析物之间的作用力）

3.同位素内标法

4.对于气相色谱，定期维护进样器（隔垫，衬管、玻璃棉）和色谱柱尤其对于基质效应的消弱有很好的效果。

在做基质加标回收实验时，选择与待测样品同源的，不含待测组分的空白基质为宜，对于某一类蔬菜，水果样品的检测，平时可以积累这一类基质对于分析物质检测的响应情况。

Q：关于标准SN/T 2441-2010《进出口食品中涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法》中，代谢物ZH是转换成涕灭威吗，直接加和吗？

A：GB2763-2019规定的涕灭威的残留标志物为：“涕灭威及其氧类似物（亚砜、砜）之和，以灭涕威表示”。应按照外标法分别测定涕灭威、涕灭威砜、涕灭威亚砜的量，再按照转换系数（conversation factor，CF）将代谢物转换成涕灭威的量，ZZ报告以涕灭威的量出，关于转换系数的计算，现举例子如下：

涕灭威砜的转换系数CF=涕灭威的分子量/涕灭威砜的分子量*100%=190.26/222.26=0.86

报告涕灭威的量=1.00*涕灭威的浓度+0.86*涕灭威砜的浓度+0.92*涕灭威亚砜的浓度。

Q：对于同分异构体怎么实现较好的分离？S-氰戊菊酯和氰戊菊酯为什么没有分别制定限量值？

A：对于同分异构体：1.可以通过改变升温程序，对于出峰靠的比较近的，一般可以降低升温速率；2.换用不同极性的色谱柱来达到相同农药的同分异构体的分离。

GB2763里面对于氰戊菊酯和S-氰戊菊酯的残留物为：氰戊菊酯（异构体之和）；化学名称为 ( RS) - α- 氰基- 3- 苯氧基苄基 (RS) - 2- ( 4- 氯 苯基) - 3- 甲基丁酸酯。从化学结构可知, 氰戊菊酯有2个手性碳原子, 因此有4种光学异构体, 分别为SS, SR, RS, RR, 其生物活性依次为 SS>SR>RS>RR。其中SS异构体 生物活性比其他异构体高2～4倍。氰戊菊酯的4种光学异构体中, SR和RS, SS 和RR为2对对映异构体, 不能用色谱法直接分离4个异构体, 必须通过手性柱分离技术才能将2对对映体分别分开。目前通用的色谱技术一般只分离和定量的是SR+RS的总量及SS+RR的总量。正是由于4种异构体完全分离的分析手段要求太高, 而一般的检测机构无法达到, 因此欧盟对氰戊菊酯的残留限量分为2栏, 分别针对 SS+RR异构体总量及RS+SR异构体总量定出MRL。茶叶和蔬菜中 SS+RR异构体总量MRL分别为：0.05和0.02mg/kg；茶叶和蔬菜中 RS+SR异构体总量MRL分别为：0.05和0.02mg/kg。ZG对于氰戊菊酯的MRL值，只做总量限值规定，另外日本、美国等也未分别规定S-氰戊菊酯与氰戊菊酯分别制定限量值。