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卒中术后脑组织病理学评估 - H&E染色

深圳市瑞沃德生命科技有限公司 2020-04-11

本文节选自《实验卒中手术学》主编:杨国源

书号:ISBN 978-7-5046-6264-4/R·1648


1.冰冻切片苏木素伊红染色


1、将4%多聚甲醛灌注后的大脑,用冰冻切片机切片,厚度为10~40微米。

2、将脑片贴在载玻片上,并且吹干过夜。

3、将脑片脱脂(若是脑组织直接冰冻,则不需要脱脂):

       (a)将脑片浸没在氯仿和乙醇混合物中至少1小时。

       (b)将脑片分别在、95%、70%和50%的乙醇中各浸泡5分钟,然后用蒸馏水冲洗。

注意:必须等到片子完全干燥(没有水滴)。如果脑片是几天前准备的,在染色之前必须放到蒸馏水中浸泡5分钟。

4、染色步骤:

       (a)将苏木素滴在脑片上,染色20~25分钟。整个过程用眼睛或显微镜观察,保证细胞核变蓝。

       (b)用蒸馏水洗2次。

       (c)用0.25%的氨水溶液轻轻冲洗约10秒。

       (d)用蒸馏水洗2次。

       (e)用伊红染色10秒

       (f)用蒸馏水洗2次。

       (g)用70%、80%、90%、95%、的乙醇脱水1次,每次3分钟。

       (h)用乙醇与二甲苯混合液脱水3分钟。

       (i)用二甲苯处理5分钟

       (j)滴2~3滴封片剂,用盖玻片封住脑片,准备在显微镜下观察。


2.石蜡切片的苏木素-伊红染色

1、修剪组织:如果大脑固定在4%6的多聚甲醛里,那么修剪组织必须在通风橱里进行。去除小脑和嗅球部分。大脑用水冲洗干净,冠状切片切成3份。组织放在生理盐水中。

2、处理以及石蜡包埋:在自动包埋机上进行包埋。金属盒放在机器中过夜。组织进行梯度脱水,并用石蜡进行包埋。

3、组织包埋的步骤:

       (a)加热温度控制在59~61℃;

       (b)样品控制台温度在59~61℃;

       (c)冷冻台温度为5℃;

       (d)组织转移到加热台上,浸在石蜡中,然后移至样品控制台。

注意:不要把样品放反了,同时要保持它们的方向一致。把铁块放在冷冻台上,冷却20分钟。

4、室温下在切片机上切片:

       (a)水浴温度控制在45~50℃。

       (b)石蜡组织放在冰水混合物中。

       (c)室温下设置好切片机。

       (d)45℃,吹干载玻片20分钟。

       (e)蜡块固定在切片机上,修整蜡块表面,直至大脑组织出现。

       (f)切片,厚度可根据试验要求,切成4~10微米。

       (g)脑片转移到水浴中,然后贴在载玻片上。

5、预染:载玻片在60℃的烘箱中烤片15分钟,融化石蜡,使乙醇挥发。注意用架子架住载玻片。

6、HE染色:可以自动也可以手动进行。

1)自动:染色在染色机中进行,依次用以下溶液处理:

       (a)3次二甲苯;

       (b)2次乙醇;

       (c)2次95%乙醇;

       (d)苏木素染色;

       (e)2次95%乙醇;

       (1)70%乙醇;

       (g)伊红染色;

       (h)70%乙醇;

       (i)3次二甲苯。


2)手动:每一步骤约1~2分钟,整个过程需要25~30分钟。载玻片放入盒子中,滴2~3滴封片剂,然后用盖玻片小心地盖在上面。

① 注意事项:

       (a)封片前片子不要干燥,封片剂将地封住脑片;

       (b)在完全干燥之前保证片子平整;

       (c)在显微镜下观察片子的染色效果。例如:如果组织在冰盒中的浸泡时间不足够长,组织看起来会有皱褶。如果漂片温度太高,片子会碎,如果温度太低,片子不能漂浮。

② 手动的HE染色方法:

       (a)3次二甲苯,每次2分钟,脱去脂肪和蜡;

       (b)乙醇,每片10滴;

       (c)95%乙醇,2次,每片10滴;

       (d)蒸馏水洗;

       (e)苏木素染色15分钟;

       (f)蒸馏水洗2次;

       (g)0.25%氨水洗,直至组织变蓝;

       (h)蒸馏水洗2次;

       (i)0.5%的伊红染色,每片10~20滴;

       (j)95%乙醇,洗2次,每片10~15滴;

       (k)乙醇,每片10滴;

       (l)3次二甲苯,每片10滴。


苏木素伊红染色后细胞核呈蓝色,细胞质呈粉红色或红色。如下图所示:

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