如何进行峰的纯度分析(转)

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  lance阿斯兰 2016-10-02 03:55:49

  液相色谱技术 利用四通道紫外检测器确定峰纯度 对于一个色谱峰是否只包含一个或者多个组分的峰纯度问题，一般情况下我们会通过选择PDA检测器或多次改变测试条件的方式去判定，但具备PDA的单位并不多，而使用普通的单波长检测器，只能靠原信号或导数信号的峰形状去判定，这种方法当然很不可靠，因为色谱峰形状受众多参数的影响，并在很大程度上取决于色谱的分辨率、信号/噪音。如何才能更好的的解决这一问题呢？基于这种实际问题，戴安率先推出了全数字支持四通道的紫外检测器UVD170U，采用二极管阵列检测器的设计方式，实现了四通道实时输出，再通过原装变色龙软件支持，便可以很轻松的输出比率色谱，并判定峰的纯度。其结果可以用图示方式表示或者以峰纯度因子形式的数字量表示。为了增加紫外－可见光谱鉴定的准确性，在进行谱库检索之前，Z好首先做色谱峰纯度检验，还需参考标准组分的保留时间，对复杂基体的光谱干扰和基线噪声干扰也应扣除。 对于一个纯化合物，在波长λ1下的摩尔吸光系数应当正比于另一波长λ2下的摩尔吸光系数，即两个波长下的吸光值比（A λ 1/A λ 2）应为常数。采用多通道检测技术，测定色谱分离组分在多个不同波长的吸收比，由于此比值与浓度无关，所以当沿色谱峰各点的吸光度比为一常数时，表明该峰是纯峰。所谓多通道检测是指利用计算机技术，用多个波长（一般是Z大吸收波长）检测色谱流出物，通过计算机数据处理，将其吸收比值连续计算予以定性和评价色谱纯度。由于不用重复进样和改变色谱分离条件，大大节约了分析时间，提高了检测灵敏度和选择性。故多通道检测技术中Z常用的两波长的吸光值比率法（比率色谱法）多用于质量控制，如：药物的纯度控制，成分复杂的中药分析等。而中研究分析中应用不太广泛。 多重吸收比率法的原理与两个波长的吸光值比率法相近。不只是用两个波长，而是相对于Z大吸收波长所有波长做出比率图。程度重复检索出每一光谱的Z大吸收波长，并据此重建色谱信号，再沿整个色谱图画出其它波长的色谱信号比率。由这一程序就很快地观察到在整个色谱图上所有峰的纯度情况。 ●纯度测定方法应选用色谱法，并采用两种以上不同分离机理或不同色谱条件并经验证的色谱方法相互验证比较，同时采用二极管阵列检测器或其它适宜方法检测HPLC法的色谱峰纯度，而后根据测定结果经统计分析确定对照品(标准品)原料的纯度。 1、 定性气相色谱仪一般都串接两个检测器：TCD（热导检测器）和FID（氢火焰离子化检测器），利用双通道色谱工作站，可以同时获得两个检测器的信号。不同物质，两个检测器信号的比值一般是不同的，这个特点可以作为物质定性的依据之一。与此类似，如果液相色谱仪上串接有UV（紫外检测器）和ELSD（蒸发光散射检测器），那么是否可以两个检测器信号的比值作为物质定性的一个依据呢？2、 定量Water 今年推出的2487双波长紫外检测器，其中一个特点就是说它可以进行峰纯度检查（但好像Waters的Breeze软件并不能给出峰的纯度评价，也许是我还不知道吧）。下面是Waters Breeze 软件采集的Ratio Plot，即两个不同波长通道采集的信号的比例图。 样品1样品2对照与此类似，如果液相色谱仪上串接有UV（紫外检测器）和ELSD（蒸发光散射检测器），那么是否可以用两个不同检测器通道采集的信号的比例图来进行峰纯度的评价呢？我们都知道，紫外图谱是定性效果Z差的。两个不同波长的吸收比值并不能作为定性参数。双波长检查峰纯度的原理是，如果从峰起点到峰终点，洗脱出来的是同一物质，那么，两个波长的信号（实际上就是吸收度）比值应该相同，从上面对照图我们可以看到这一点，起点到终点基本成一直线。 3、 色谱工作站软件的改进建议 算法建议如下： 1首先假设，两个检测器上的信号和被测物质的浓度成线性关系，则两个线性关系相除后仍然线性的。（ELSD的检测信号有时候和物质浓度不成正比，这就需要先进行转换） 计算AB线段上的点的进行线性拟合，峰纯度原高，线性关系越好。然后，计算样品和对照拟合的线性方程的夹角。理想情况下，基线如果是平直的直线（Y=b），色谱峰纯，那么，峰起点到终点的线段的线性关系应该为1，夹角应该为0度，而且直线方程应该是Y=B的形式。我们可以把两个参数统一起来 峰纯度=相关系数×夹角的余弦值 Purity=r×cosθ 利用四通道紫外检测器确定峰纯度 对于一个色谱峰是否只包含一个或者多个组分的峰纯度问题，一般情况下我们会通过选择PDA检测器或多次改变测试条件的方式去判定，但具备PDA的单位并不多，而使用普通的单波长检测器，只能靠原信号或导数信号的峰形状去判定，这种方法当然很不可靠，因为色谱峰形状受众多参数的影响，并在很大程度上取决于色谱的分辨率、信号/噪音。如何才能更好的的解决这一问题呢？基于这种实际问题，戴安率先推出了全数字支持四通道的紫外检测器UVD170U，采用二极管阵列检测器的设计方式，实现了四通道实时输出，再通过原装变色龙软件支持，便可以很轻松的输出比率色谱，并判定峰的纯度。其结果可以用图示方式表示或者以峰纯度因子形式的数字量表示。为了增加紫外－可见光谱鉴定的准确性，在进行谱库检索之前，Z好首先做色谱峰纯度检验，还需参考标准组分的保留时间，对复杂基体的光谱干扰和基线噪声干扰也应扣除。 对于一个纯化合物，在波长λ1下的摩尔吸光系数应当正比于另一波长λ2下的摩尔吸光系数，即两个波长下的吸光值比（A λ 1/A λ 2）应为常数。采用多通道检测技术，测定色谱分离组分在多个不同波长的吸收比，由于此比值与浓度无关，所以当沿色谱峰各点的吸光度比为一常数时，表明该峰是纯峰。所谓多通道检测是指利用计算机技术，用多个波长（一般是Z大吸收波长）检测色谱流出物，通过计算机数据处理，将其吸收比值连续计算予以定性和评价色谱纯度。由于不用重复进样和改变色谱分离条件，大大节约了分析时间，提高了检测灵敏度和选择性。故多通道检测技术中Z常用的两波长的吸光值比率法（比率色谱法）多用于质量控制，如：药物的纯度控制，成分复杂的中药分析等。而中研究分析中应用不太广泛。 多重吸收比率法的原理与两个波长的吸光值比率法相近。不只是用两个波长，而是相对于Z大吸收波长所有波长做出比率图。程度重复检索出每一光谱的Z大吸收波长，并据此重建色谱信号，再沿整个色谱图画出其它波长的色谱信号比率。由这一程序就很快地观察到在整个色谱图上所有峰的纯度情况。 ●纯度测定方法应选用色谱法，并采用两种以上不同分离机理或不同色谱条件并经验证的色谱方法相互验证比较，同时采用二极管阵列检测器或其它适宜方法检测HPLC法的色谱峰纯度，而后根据测定结果经统计分析确定对照品(标准品)原料的纯度。 1、 定性气相色谱仪一般都串接两个检测器：TCD（热导检测器）和FID（氢火焰离子化检测器），利用双通道色谱工作站，可以同时获得两个检测器的信号。不同物质，两个检测器信号的比值一般是不同的，这个特点可以作为物质定性的依据之一。与此类似，如果液相色谱仪上串接有UV（紫外检测器）和ELSD（蒸发光散射检测器），那么是否可以两个检测器信号的比值作为物质定性的一个依据呢？2、 定量Water 今年推出的2487双波长紫外检测器，其中一个特点就是说它可以进行峰纯度检查（但好像Waters的Breeze软件并不能给出峰的纯度评价，也许是我还不知道吧）。下面是Waters Breeze 软件采集的Ratio Plot，即两个不同波长通道采集的信号的比例图。 样品1样品2对照与此类似，如果液相色谱仪上串接有UV（紫外检测器）和ELSD（蒸发光散射检测器），那么是否可以用两个不同检测器通道采集的信号的比例图来进行峰纯度的评价呢？我们都知道，紫外图谱是定性效果Z差的。两个不同波长的吸收比值并不能作为定性参数。双波长检查峰纯度的原理是，如果从峰起点到峰终点，洗脱出来的是同一物质，那么，两个波长的信号（实际上就是吸收度）比值应该相同，从上面对照图我们可以看到这一点，起点到终点基本成一直线。 3、 色谱工作站软件的改进建议 算法建议如下： 1首先假设，两个检测器上的信号和被测物质的浓度成线性关系，则两个线性关系相除后仍然线性的。（ELSD的检测信号有时候和物质浓度不成正比，这就需要先进行转换） 计算AB线段上的点的进行线性拟合，峰纯度原高，线性关系越好。然后，计算样品和对照拟合的线性方程的夹角。理想情况下，基线如果是平直的直线（Y=b），色谱峰纯，那么，峰起点到终点的线段的线性关系应该为1，夹角应该为0度，而且直线方程应该是Y=B的形式。我们可以把两个参数统一起来 峰纯度=相关系数×夹角的余弦值这样，r=1，θ=0时，纯度为1，即

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