全部评论(2条)
-
- ljlssf 2017-12-21 00:00:00
- 因为丙酮与碘反应生成碘仿需在碱性条件下进行
-
赞(13)
回复(0)
-
- 死神少宇 2017-12-21 19:32:11
- 实验概要本实验利用酮体测定法对脂肪酸的β-氧化进行了测定,介绍了该方法的原理及步骤等。实验原理酮体包括乙酰乙酸、b—羟丁酸和丙酮三种物质。在肝脏中,脂肪酸经b—氧化作用生成乙酰CoA。生成的乙酰CoA可经代谢缩合成乙酰乙酸,而乙酰乙酸既可脱羧生成丙酮,又可经b—羟丁酸脱氢酶作用被还原生成b—羟丁酸,三种物质统称酮体。酮体为机体代谢的正常中间产物,在肝脏中生成后须被运往肝外组织才能被机体所利用。在正常情况下,动物体内含量甚微;患糖尿或食用高脂肪膳食时,血中酮体含量,尿中也能出现酮体。本实验用丁酸做底物,将之与新鲜的肝匀浆一起保温后,再测定其中酮体的生成量。因为在碱性溶液中碘可以将丙酮氧化为碘仿(CHI3),所以通过用硫代硫酸钠(Na2S2O3)滴定反应中剩余的碘就可以计算出所消耗的碘量,进而可以求出以丙酮为代表的酮体含量。有关的反应式如下: 根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫酸钠溶液体积之差,可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。主要试剂1. 10%(w/v)氢氧化钠溶液:称取10g氢氧化钠,在烧杯中用少量蒸馏水将之溶解后,定容至100ml。2. 0.1mol/L正丁酸溶液:称取13g碘和约40g碘化钾,放置于研钵中。加入少量蒸馏水后,将之研磨至溶解。用蒸馏水定容到1000ml,在棕色瓶中保存。此时可用标准硫代硫酸钠溶液标定其浓度。3. 0.5mol/L正丁酸:取0.05ml正丁酸,用0.5mol/L氢氧化钠溶液100ml溶解即成。4. 0.1mol/L碘酸钾(KIO3)溶液:称取0.8918g干燥的碘酸钾,用少量蒸馏水将之溶解,Z后定容至250ml5. 0.1mol/L硫代硫酸钠(Na2S2O3)溶液:称取25g硫代硫酸钠,将它溶解于适量煮沸的蒸馏水中,并继续煮沸5min。冷却后,用冷却的已煮沸过的蒸馏水定容到1000ml。此时即可用0.1mol/L碘酸钾溶液标定其浓度。6. 硫代硫酸钠溶液的标定:将蒸馏水25ml、碘化钾2g、碳酸氢钠0.5g、10%盐酸溶液20ml加入一支锥形瓶内。另取0.1mol/L碘酸钾溶液25ml加入其中,然后用硫代硫酸钠溶液将之滴定至浅黄色。再加入0.1%淀粉溶液2ml,然后继续用硫代硫酸钠溶液将之滴定至蓝色消褪为止。另设一空白,其中仅以蒸馏水代替碘酸钾,其余操作相同。计算硫代硫酸钠溶液的浓度所依据的反应式如下:5KI KIO3 6HCI=3I2 6KCI 3H2OI2 2Na2S2O3=Na2S4O6 2NaI7. 10%(v/v)盐酸溶液:取10ml盐酸,用蒸馏水稀释到100ml。8. 0.1%(w/v)淀粉溶液:称取0.1g可溶性淀粉,置于研钵中。加入少量预冷的蒸馏水,将淀粉调成糊状。再慢慢倒入煮沸的蒸馏水90ml,搅匀后,再用蒸馏水定容至100ml。9. 0.9%(w/v)氯化钠。10. 1/15mol/L、PH7.7磷酸缓冲液(A液)1/15mol/L Na2HPO4溶液:称取Na2HPO4·2H2O1.187g,将之溶解于100ml蒸馏水中即成。(B液)1/15mol/L KH2PO4溶液:称取KH2PO40.9078g,将之溶解于100ml蒸馏水将之溶解,Z后定容至100ml。取A液90 ml、B液10 B液,将两者混合即可。主要设备1. 匀浆器(或搅拌机)2. 碘量瓶。实验材料动物活体实验步骤1.肝匀浆的制备 1) 将动物(如鸡、家兔、大鼠或豚鼠等)放血处死,取出肝脏。 2) 用0.9%氯化钠溶液洗去肝脏上的污血,然后用滤纸吸去表面的水分。溶液至总体积为10ml。2.酮体生成 1) 取两个锥形瓶,编号,按下表操作。锥形瓶试剂(ml)AB新鲜肝匀浆—2.0预先煮沸的肝匀浆2.0—PH7.7 的磷酸缓冲液3.03.00.5mol/L正丁酸溶液2.02.0 2) 将加好试剂的2个锥形瓶摇匀,放入43℃恒温水浴锅中保温40min后取出。 3) 于2个锥形瓶分别加入20%三溶液[注2]3ml,摇匀后,于室温放置10min。 4) 将锥形瓶中的混合物分别用滤纸在漏斗上过滤,收集无蛋白滤液于事先编号A、B的试管中。3.酮体的测定 1) 取碘量瓶[注3]2个,根据上述编号顺序按下表操作。碘量瓶编号试剂(ml)AB无蛋白滤液5.05.00.1mol/L碘液3.03.010%NaOH3.03.0 2) 加完试剂后摇匀,将碘量瓶于室温放置10min。 3) 于各碘量瓶分别滴加10%盐酸溶液,使各瓶中溶液中和到中性或微酸性(可用PH试纸进行检测)。 4) 用0.02mol/L硫代硫酸钠溶液滴定到碘量瓶中的溶液呈浅黄色时,往瓶中滴加数滴0.1%淀粉溶液,使瓶中溶液呈蓝色。 5) 继续用0.02mol/L硫代硫酸钠溶液滴定到碘量瓶中溶液的蓝色消褪为止。 6) 记录下滴定时所用去的硫代硫酸钠溶液毫升数,按下式计算样品中丙酮的生成量。4.结果与计算根据滴定样品与对照所消耗的硫代硫钠溶液体积之差,可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。实验中所用肝匀浆中生成丙酮的量(mol)=(A-B)×C×1/6A:为滴定样品A(对照)所消耗的0.02mol/L硫代硫酸钠溶液的毫升数。B:不滴定样品B所消耗的0.02mol/L硫代硫酸钠溶液的毫升数。C:硫代硫酸钠溶液的浓度(mol/L)注意事项1. 肝匀浆必须新鲜,放置久则失去氧化脂肪酸能力。2. 三作用是使肝匀浆的蛋白质、酶变性,发生沉淀。3. 碘量瓶作用是防止碘液挥发,不能用锥形瓶代替。
-
赞(16)
回复(0)
热门问答
- 脂肪酸的β氧化实验中,丙酮测定过程中为什么要加入氢氧化钠溶液
- 脂肪酸的β氧化实验中,丙酮测定过程中为什么要加入氢氧化钠溶液
2017-12-20 03:54:36
1556
2
- 凯氏定氮法测定蛋白质含量蒸馏时为什么要加入氢氧化钠溶液
2017-12-15 16:04:05
1502
1
- 气相色谱法测定脂肪酸测定中,水浴后加入碳酸钠溶液的目的
2017-02-13 03:55:20
424
1
- 测定酸性洗涤纤维中加入丙酮的作用
2011-11-12 03:58:59
357
2
- 凯氏定氮法在蒸馏时为什么要加入氢氧化钠
2015-11-10 20:39:14
1646
1
- DNA抽提过程中为什么要加入醋酸钠
2018-03-15 20:02:22
721
1
- 植物性食品辛硫磷农药残留量的测定为什么加入石油醚和丙酮
2018-12-09 17:58:48
395
0
- 测定氢氧化钠溶液的导电性是什么变化
2016-06-15 02:33:06
323
2
- 制备冻存管菌悬液的溶液中为什么要加入甘油
2016-08-27 22:51:07
417
1
- 微量凯氏定氮法在蒸馏时为什么要加入氢氧化钠
2018-11-23 15:07:55
367
0
- 要干燥的PH试纸为什么可以测氢氧化钠溶液
2018-01-16 13:04:36
795
1
- 食用油精炼过程中为什么要转化不饱和脂肪酸成饱和脂肪酸呢?
- 食用油精炼过程中要促进油脂中的不饱和脂肪酸加氢而成饱和脂肪酸,按理说不饱和脂肪酸对身体比较好,为什么要转化成饱和脂肪酸呢?... 食用油精炼过程中要促进油脂中的不饱和脂肪酸加氢而成饱和脂肪酸,按理说不饱和脂肪酸对身体比较好,为什么要转化成饱和脂肪酸呢? 展开
2013-04-17 01:04:29
679
2
- 蛋壳中碳酸钙含量测定为什么要逐滴加入盐酸
2017-02-19 01:30:29
842
3
- 在凯氏定氮中,怎么避免加入消化液及氢氧化钠溶液的虹吸样品
2012-08-13 02:46:16
348
1
- 为什么氢氧化钠溶液不属于电解质
2018-03-25 23:08:12
723
1
- 氢氧化钠为什么要放在烧杯中称量?
2017-01-23 13:18:33
385
1
- 为什么要同时测定硫酸的空白溶液
2016-10-15 05:16:34
932
1
- 为什么加入盐酸的蔗糖溶液要迅速放入旋光仪
2017-04-07 15:47:26
342
2
- 水中游离氯和总氯的测定 样品采集为什么加入氢氧化钠
2018-12-15 02:11:22
309
0
- 醋酸溶液中加入醋酸钠,导电性为什么增强
2015-04-22 13:05:37
737
2
参与评论
登录后参与评论