流式圈出CD8细胞必须先圈CD3 吗

怎么设置先后的细胞群Gate，完全取决于你要做的实验。
如果是测正常的T细胞，先划出CD3+，然后在CD3+的细胞中再看CD8+的比例没问题。
如果是看白血病或者淋巴瘤的细胞，那就要根据所要诊断的需要了。肿瘤细胞完全可以是CD3-，但CD8+的。