流式细胞仪检测的是相对值,所以必须要有各种对照来设定机器的参数和阈值。这个清单比较长。就你说的这三种,我可以展开说一下。
一般用荧光标记的抗体染色后,样本有可能会出现两个细胞群,一个阳性,一个阴性的,这样的很好判断。另外一种情况,就是整个细胞群的信号在染色后发生了漂移,但是看不出阳性和阴性的分界。这时候,对照的作用就体现出来了。
所谓空白对照,就是没有用荧光抗体染色的样本,上机检测后,也会得到信号。这时候要调节PMT(也就是检测器)的电压,这样对信号的扩增就会发生变化。这个酶染色的样本,就把信号置于Z低的位置。如果是对数比例的信号轴,一般是置于10的3次方以下的位置。
而阴性对照,就是已知没有可被抗体识别靶分子的样本。用荧光抗体染色后,信号应该和空白对照相似。如果有很大的不同,说明抗体的非特异性结合很高,或者染色的步骤有问题。
而阳性对照,就是用已知肯定会有被抗体识别的靶分子的样本。用荧光抗体染色后,应该会出现较强的信号。这个样本有两个作用,一是出现强信号后,可以适当调节PMT的电压,让信号都位于可检测范围之内。另外,如果没有出现预期的信号,那可能是抗体失效,或者染色方法有问题。那检测的其他样本的结果也就无效了。