1、样品处理:
以无菌操作,先用酒精棉球擦拭样品表面后,用无菌剪刀将包装剪破,量取检样25mL放入225mL灭菌生理盐水当中,充分振荡,混合均匀,制成10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4
3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液,用无菌移液管分别吸取1mL到无菌平皿中,每个稀释度做2个平皿;同时,吸取1mL无菌生理盐水到1个平皿中作为空白对照
4、熔化培养基
5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中,并转动平皿使其混合均匀
6、 37℃倒置培养2天
7、按照计数原则计数
菌落计数方法
v 选取菌落数在30~300cfu之间,无蔓延生长的平板计数
v 低于30的记录具体菌落数,大于300的可记录为多不可计,每个稀释度采用2个平行的均数
v 有较大片状菌落生长者不宜采用,若片状小于平板一半时且余部均匀分布,则以半个平板菌落数2倍报告
v 无明显界限链状菌落每条单链视为一个菌落