如何设计基因cds序列的pcr引物

提取细胞总RNA然后用试剂盒反转录成cDNA，用cDNA作为模板扩增基因的CDS区，然后想要转染进细胞中。比如MYOD1基因，首先在NCBI找到它的mRNA序列，然后找到它的CDS序列，全部复制下来，在primer 5.0 中。正向引物直接从CDS的diyi个核酸开始（比如18bp），反向引物从CDSZ后一个核酸开始，向前选择序列（比如17bp），调节2个引物的长度（不一定要一致），尽量避免错配，二聚体，产生错的产物即可。Z后在引物的5‘端添加酶切位点以及保护碱基。