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进行PCR扩增时为什么要将目的基因连到载体上?直接对其进行扩增不行吗?

_丶Kinky 2009-07-23
如题!~~如果比加载体可以不用加引物,直接用水补充不可以吗?
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a340244226
连到载体后扩增有好处:载体相对于基因组或cDNA复杂度降低,扩增出的片段纯度比较高,而且循环数可以很低,如20-25循环

切忌用载体扩增时用高循环,否则会有大量smear

引物肯定需要加的!mg2+倒可以不加——我试过!

如果没有后续实验不建议连上载体,因为太费时费事

有问题再联系即可。
12 0 2009-07-24 0条评论 回复
zpzp78
其实都可以,只不过直接扩增仅仅是目的基因,扩增后还是要连接到载体上,我认为连接到载体上后再扩增,只是为了方便吧.
15 0 2009-07-24 0条评论 回复
jiaxiaoxia1986
不连接到载体上你怎么扩增,养分呢
18 0 2009-07-24 0条评论 回复
原驼sparrowa
PCR扩增的是重组基因 如果不将目的基因载入直接扩增 那不只是单纯的复制原来的基因了么

引物就是key 只有有了这个才能将目的基因载入为什么会想到是水呢
18 0 2009-07-24 0条评论 回复
好好先生Tel
你的问题有点难以理解。

PCR怎么做要看你的目的啊,如果从基因组中扩基因,连个鸟载体,当然是直接扩增。如果你要获得全长序列,当然要载体,否则首尾的序列不可知。

至于“不加载体可以不加引物”就不知道你在说什么了。
9 0 2009-07-24 0条评论 回复
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