仪器社区

在基因进行PCR扩增过程中涉及到哪些要素?其中哪些因素决定了PCR的效率?

5600398 2016-11-04
评论
全部评论
小啦啦gg
预变性
模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要,一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。
变性步骤
循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可 缩短该步骤时间
变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败。
引物退火
退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。
引物延伸
引物延伸一般在72℃进行(Taq酶Z适温度)。
循环数
大多数PCR含25-35循环。
Z后延伸
在Z后一个循环后,反应在72℃维持10-30分钟.使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链。——————————————————————————————————————————
如果进行PCR首先确定的是底物的纯度,苯酚有报道称会印象PCR过程。
引物就不多说了,退火温度对PCR的特异性有较大影响。延伸时间要看扩增片段长短,循环数不能太多要不非特异性扩增太多。
7 0 2016-11-04 0条评论 回复
您可能感兴趣的社区主题
加载中...
发布 评论