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在基因进行pcr扩增过程中涉及到哪些要素?其中哪些因素决定了其效率

sockusuallyn 2014-12-21
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忆饱商
无先后顺序,关于要素能想到的是:1,引物设计合理。包括退火温度合适也就是GC含量不要太高;特异性强也就是只结合目的基因;自身不形成引物二聚体;2,模板质量要高,主要纯度要高不含杂质或很少。3,合适的反应体系,就是聚合酶、模板、引物、buffer、dNTP、水、Mg2+离子等的配比合适,体系总量合适。4,退火温度,影响着产物纯度,也就是影响反应的特异性及反应效率。5,配制反应体系还有上样时注意不要互相污染,直接影响扩增结果。6,配制体系时Z好先加入ddH2O,Z好Z后加入酶或模板,防止提前反应。

决定效率的因素:1,模板纯度和模板量(纯度越GX率越大,一定范围内模板量越GX率越高,但是模板或是引物量太大了可能会出现非特异性扩增);2,引物的特异性(直接决定扩增的特异性);3,Mg2+离子浓度(影响聚合酶的活性,太低反应慢,太高会有非特异性扩增);4,buffer(缓冲体系要合适,否则影响扩增效率甚至扩不出来)5,退火温度(非常重要的因素,影响反应效率及特异性,退火温度过高可能无扩增产物,退火温度过低会出现非特异性扩增)6,酶(用量太大会有非特异扩增)7,反应循环数(循环数过少产物太低,循环数过高会出现非特异性扩增)

能想到的差不多就这些。
10 0 2014-12-22 0条评论 回复
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