你好,在PCR扩增中,目标片段的长度主要是由引物的特异性结合来控制的。在diyi次扩增中,因为DNA两条链分别只有一条引物结合,这样taq聚合酶理论上是延伸很长的距离的,但由于我们控制了延伸时间,新合成的链不会长的非常多。所以diyi次扩增得到的DNA是两条长(原始链),两条中等长(新链)。
第二次扩增反应时,引物和上次反应合成的链结合,之前上游引物指导和成的链现在在3‘端和下游引物结合,而下游指导合成的链在它的3’端上游引物结合,此时,新合成的链只会合成到上一次合成的链引物的起始处,因为这条链的5’端只有这么长。这样第二次合成的DNA,就有两条目标DNA分子长度的链(新链),和diyi次合成的中等长度的链(旧链)。
第三次反应的时候,第二次反应的链再次结合引物的时候,就是我们的目标双链DNA分子了。