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实时定量PCR内参基因和待测基因峰不同说明什么?

蔻笢D茰刑礈 2015-10-28
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教学的规划
内参基因和待测基因本来就不一样。

扩增曲线和溶解曲线不是一个概念。扩增曲线是每扩增一个循环,测量一次荧光强度。这个由底物的浓度和扩增效率所决定。目的基因和内参的浓度肯定不同,而且引物的序列不同,扩增效率也可能不一样,所以两者的曲线肯定有可能不一样。

SyberGreen PCR,溶解曲线是PCR完成以后,对产物逐步加温,测量荧光强度的变化,而不是荧光强度本身。DNA双链在温度达到TM附近时,发生大量的解离,荧光强度的变化Z大,出现峰值。这个峰值的位置是由PCR产物的TM值所决定的,和PCR产物的序列,GC比例有关。所以内参基因和目的基因的峰值肯定是不一样的。
13 0 2015-10-29 0条评论 回复
墩烙肇偈鹤坝
本来就不一样啊,为什么要一样?
3 0 2015-10-29 0条评论 回复
姐姐是魔鬼
内参基因和待测基因本来就不一样。
扩增曲线和溶解曲线不是一个概念。扩增曲线是每扩增一个循环,测量一次荧光强度。这个由底物的浓度和扩增效率所决定。目的基因和内参的浓度肯定不同,而且引物的序列不同,扩增效率也可能不一样,所以两者的曲线肯定有可能不一样。
SyberGreen PCR,溶解曲线是PCR完成以后,对产物逐步加温,测量荧光强度的变化,而不是荧光强度本身。DNA双链在温度达到TM附近时,发生大量的解离,荧光强度的变化Z大,出现峰值。这个峰值的位置是由PCR产物的TM值所决定的,和PCR产物的序列,GC比例有关。所以内参基因和目的基因的峰值肯定是不一样的。
7 0 2015-10-31 0条评论 回复
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